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Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.
>1. Injektion des Sehnervs
- Betäuben Sie das Tier mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin (75 mg/kg) und Medetomidin (0,5 mg/kg).
Anmerkung: Nach Einleitung der Anästhesie sind die Entzugsreflexe (Pinch-Test, Hornhaut- und Lidreflex usw.) und deren Fehlen als Indikation für den Beginn der Operation zu beobachten. Überwachen Sie die Tiere während der gesamten Operation kontinuierlich und verabreichen Sie das zusätzliche Anästhetikum (10 % der anfänglichen Ketamindosis pro Auffrischung), wenn die Reflexe vorhanden sind. In den Versuchen werden erwachsene Ratten (>12 Wochen) verwendet.
- Rasieren Sie die Haut des Operationsbereichs. Legen Sie das Tier auf ein Wärmekissen (37 °C), um die Körpertemperatur während der Operation zu halten. Bereiten Sie die Haut durch topische Anwendung von Povidon-Jod vor. Chirurgische Abdecktücher auftragen. Tragen Sie eine topische Augensalbe auf, um Hornhauttrockenheit unter Vollnarkose zu verhindern. Bewahren Sie die Asepsis mit sterilen Instrumenten auf.
- Machen Sie einen 1 bis 1,5 cm großen Schnitt in der Haut oberhalb der Augenhöhle eines zufällig ausgewählten Auges. Öffnen Sie das Unterhautgewebe, um die Augenhöhle mit einer feinen Irisschere zu erreichen. Öffnen Sie die Bindehaut und die vordere Zapfenkapsel unter dem Operationsmikroskop.
- Ziehen Sie die extraokularen Muskeln und die intraorbitalen Tränendrüsen zurück, um eine Länge von etwa 3 mm des Sehnervs freizulegen. Öffnen Sie die Dura- und Arachnoidalschichten um den Sehnerv in Längsrichtung mit einer Augenklinge.
- Führen Sie die Glaspipette in einem Abstand von 2 mm hinter dem Globus in den Sehnerv ein. Die Mikropipette aus Glas wird an einer Hamilton-Spritze befestigt.
- Injizieren Sie 1% Lysolecithin (0,4 - 1,0 μl, mit 0,02% Evan's Blue, das keine Auswirkungen auf die Myelinisierung hat) langsam über einen Zeitraum von ca. 30 Sekunden in den Nerv.
- Nähen Sie den Hautschnitt. Tragen Sie eine antibiotische Salbe auf, um Infektionen vorzubeugen. Andere Augen können als interne Steuerungen für elektrophysiologische Aufzeichnungen dienen.
- Legen Sie die Tiere auf ein Wärmekissen, um sich von der Narkose zu erholen.