Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Anästhesie und Vorbereitung
- Legen Sie das Tier in die Anästhesiekammer und leiten Sie eine Vollnarkose mit 1,8 % Isofluran und 0,9 l/min Sauerstoff ein.
- Bestätigen Sie eine adäquate Anästhesieebene durch eine Beurteilung der Spontanatmung und eine Bewertung des Bewusstseins, indem Sie die Grimassenreaktion des Tieres auf ein Zehenkneifen beurteilen.
- Tragen Sie Augengleitmittel beidseitig auf, um sich vor Hornhautreizungen oder Trockenheit zu schützen.
- Rasieren Sie die Operationsstelle(n) mit einem Rasierer oder einer automatischen Haarschneidemaschine.
- Legen Sie zu diesem Zeitpunkt eine Methode zur Identifizierung von Ratten fest, entweder über eine Ohrmarke oder ein Schwanzetikett/-markierung.
- Verabreichen Sie eine subkutane Injektion von 0,05 mg/kg Buprenorphin über den Rücken des Tieres zur Prophylaxe gegen postoperative Schmerzen.
2. Chirurgischer Ansatz und Verletzungsmuster
- Bringen Sie das Tier auf den Operationstisch und setzen Sie den Gasfluss über einen Nasenkonus fort. Stellen Sie sicher, dass ein Wärmekissen unter dem Tier und dem sterilen Feld positioniert ist, um seine Körpertemperatur zu halten.
- Legen Sie sterilisierte Gaze (aufgerollt und mit Klebeband befestigt) auf den Hals der Ratte, um sie als Nackenrolle zu verwenden; dies erhöht die Exposition des Operationsfeldes. Beachten Sie, dass die richtige Positionierung des Tieres für eine effiziente Nervenidentifikation und -dissektion von größter Bedeutung ist.
- Bereiten Sie die Gesichtshaut des Tieres für den Eingriff vor. Um eine Desinfektion zu gewährleisten, schrubben Sie die Operationsstelle dreimal mit Chlorhexidin oder einer Lösung auf Jodbasis, abwechselnd mit 70%igem Ethanol.
- Planen und markieren Sie den chirurgischen Schnitt, falls gewünscht. Manipulieren Sie das ipsilaterale Ohr in anterior-posteriorer Richtung, um die natürliche Faltung der postaurikulären Haut zu bestimmen.
- Machen Sie einen 4-5 mm großen Schnitt in der postaurikulären Falte mit einer scharfen Irisschere oder einer Klinge mit der Nummer 15. Dies kann im weiteren Verlauf des Verfahrens bei Bedarf erweitert werden.
- Präparieren Sie stumpf durch die unmittelbare subkutane Faszie und platzieren Sie einen Mikro-Weitlaner-Retraktor, um die Exposition zu verbessern. Beachten Sie, dass sich in diesem Bereich kleinkalibrige Blutgefäße befinden können. Diese vermeiden Sie am besten, indem Sie über den Weitlaner-Retraktor überlegen oder unterlegen einfahren.
- Identifizieren Sie den vorderen Digastricus, während er sich in unterer bis oberer Richtung zu seinem Ansatz entlang der Schädelbasis bewegt.
- Verteilen Sie sich sanft durch den Muskelbauch entlang des Ansatzpunkts, um die Sehne des vorderen Digastricus-Bauches freizulegen. Beachten Sie, dass die Sehne als ein dünner weißer Prozess erscheint, der vom Muskel ausgeht und einen festen Ansatz an der Schädelbasis hat.
- Nach der Identifizierung des vorderen Musculus digastricus und seiner Sehne stellen Sie den Weitlaner-Retraktor so ein, dass der Muskelbauch weiter zurückgezogen wird. Beachten Sie, dass es sich bei der anschließend freigelegten Region um den dreidimensionalen Raum handelt, in dem sich der Hauptstamm des Gesichtsnervs befindet.
Anmerkung: Diese Region wird oben und medial durch die Schädelbasis, lateral durch den vorderen Musculus digastricus, posteromedial durch den Gehörgang und inferior durch die Strukturen des Halses, einschließlich der oberflächlichen Schläfenarterie, begrenzt.
- Identifizieren Sie nach adäquater Exposition den Hauptstamm des Nervus facialis, wie er unterhalb der Sehne des Musculus digastricus nach unten verläuft, wo er das Foramen stylomastoideus von der Schädelbasis verlässt. Beachten Sie, dass der Nerv als perlmuttweißer Strang erscheint, der von der Ohrspeicheldrüsen-Masseterusfaszie des Tieres umhüllt ist. Seien Sie aus den folgenden Gründen vorsichtig, wenn Sie den Nerv weiter freilegen.
- Vermeiden Sie aggressive Dissektionen oder senkrechte Spreizungen, um sich vor dehnungsvermittelten Neuropraxie-Verletzungen zu schützen.
- Vermeiden Sie eine aggressive posterior und medial gerichtete Dissektion, um sich vor einer Verletzung des dünnen Gewebes über dem Gehörgang zu schützen, da dies die Mittelohrflora in das Operationsfeld einbringen könnte.
- Vermeiden Sie eine Schädigung der oberflächlichen Schläfenarterie durch eine breite medial und inferior gerichtete Dissektion. Beachten Sie, dass eine Verletzung durch eine lebhafte, pulsierende Blutung gekennzeichnet ist.
- Wenn die Arterie verletzt ist, üben Sie sofort Druck mit einem Applikator mit Wattespitze oder steriler Gaze über eine Pinzette aus. Blutstillungsmittel oder flüssiger Fibrindichtstoff können in unmittelbarer Nähe platziert werden. Denken Sie daran, dass das Tier zur Flüssigkeitsstabilisierung möglicherweise eine subkutane Injektion von 0,9 % steriler Kochsalzlösung benötigt.
- Verfolgen Sie den Hauptstamm distal, indem Sie entlang des Nervs in unterer Richtung distal vom Ausgang des Foramen stylomastoideus aus präparieren.
- Verlängern Sie den ursprünglichen Schnitt, um den Nerv und seine Äste vollständig freizulegen. Vermeiden Sie eine Störung der Ohrspeicheldrüse, da dies zu einer postoperativen Sialozele führen kann.
- Induzieren Sie die gewünschten Verletzungsmuster wie folgt.
- Bei einer Quetschverletzung verwenden Sie eine Juwelierzange mit glatter Oberfläche, um den Nerv fest zu fassen und zu komprimieren9. Üben Sie 30 Sekunden lang konstanten und reproduzierbaren Druck auf den Nerv aus, um eine angemessene Quetschverletzung zu gewährleisten.
- Für eine einfache Durchtrennung fassen Sie die Faszie, die über dem Nerv liegt, oder das unmittelbare Epineurium, mit einer feinen Zange und durchtrennen Sie den Nerv mit einer scharfen Mikroschere sauber an der gewünschten Stelle mit einem einzigen Schnitt. Achten Sie darauf, dass mit der Zange kein übermäßiger Zug auf den Nerv ausgeübt wird.
- Erstellen Sie für ein Nervenlückenmodell die gewünschte Nervenlücke mit einer ähnlichen Methode wie bei der einfachen Durchtrennungsverletzung. Verwenden Sie den sterilisierten Schaft eines Applikators mit Wattespitze, der intraoperativ auf die gewünschte Nervenspaltlänge geschnitten ist, um die Ähnlichkeit des Verletzungsmusters zwischen den Tieren sicherzustellen.
>3. Verschluss der Wunde
- Spülen Sie die Wunde mit steriler Kochsalzlösung und trocknen Sie sie mit steriler Gaze.
- Nähern Sie sich den Hauträndern auf einfache, subkutikuläre Weise mit resorbierbaren Nähten an oder verwenden Sie Hautkleber oder Wundklammern, die auch für den Wundverschluss akzeptabel sind. Setze einen vergrabenen Stich ein, indem du einen tiefen bis oberflächlichen Biss auf einen Hautrand und dann einen anschließenden oberflächlichen bis tiefen Biss auf den gegenüberliegenden Hautrand nimmst.
