Etablierung einer aktiven HIV-Infektion im Rattenmodell

Zusammenfassung

Quelle: Li, H., McLaurin, et al. Ein Rattenmodell der EcoHIV-Gehirninfektion. J. Vis. (2021).

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Injektion chimärer HIV-Viren in die Hirnrinde einer Ratte, wo sich die Virus-RNA in das Wirtsgenom integriert, repliziert und ausbreitet, um eine aktive HIV-Infektion im experimentellen Modell zu etablieren.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Stereotaktische Operationen mit dem EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

Virus

1. Betäuben Sie Ratten mit 3% Sevofluran. Wenn die Ratten nicht auf schädliche Reize reagieren und ihre Reflexe fehlen, fahren Sie mit Schritt 1.2 fort.
2. Rasieren Sie die Haare aus der Gehirnregion und sterilisieren Sie die Haut zweimal mit 70% Ethanol und einem Peeling auf Chlorhexidin-Basis. Befestigen Sie die Ratte in Bauchlage im stereotaktischen Apparat.
3. Machen Sie einen Schnitt (5-6 cm) durch die Haut entlang der Mittellinie der Kopfhaut.
4. Markieren Sie zwei Bohrpositionen bei 0,8 mm lateral, 1,2 mm rostral zu bregma. Bohren Sie in jede Schädelposition ein Loch (Durchmesser 0,4 mm).
5. Titrierte EcoHIV-Lentiviruslösung (1,04 × 10⁶ TU/ml) in eine 10 μl Injektionsspritze füllen. Befestigen Sie die Spritze an der stereotaktischen Apparatur.
6. Bewegen Sie die Nadel nahe der Oberfläche des Bohrlochs nach unten. Messen und bewegen Sie 2,5 mm in der Tiefe.
7. 1 μl Viruslösung mit einer Geschwindigkeit von 0,2 μl/min infundieren. Halten Sie die Nadel 5 Minuten lang innerhalb des Injektionsbereichs. Bewegen Sie die Nadel langsam nach oben, bis sie sich außerhalb des Rattenschädels befindet.
8. Nähen Sie die Haut mit einem 4-0 Seidenfaden.
9. Sterilisieren Sie den Schnitt einmal mit 70% Ethanol. Subkutan injizieren Sie Butorphanol (Dorolex, 0,1 mg/kg Körpergewicht).
10. Bringen Sie die Ratte mit einem Heizkissen in eine Aufwachkammer, bis sie aufwacht.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Antibiotisch-antimykotische Lösung	Cellgro	30004CI	100-mal
Deckglas	VWR	Nr. 637-137
Bohrer
Ethicon Vicryl Plus Antibakteriell, 4-0 Polyglactin 910 Nahtmaterial, 27 Zoll. FS-2	Med Vet International	VCP422H
Hamilton Spritze	Hamilton	Nr. 1701
Iris-Pinzette	Welt Präzisionsinstrumente	Artikel-Nr.: 15914
Iris-Schere	Welt Präzisionsinstrumente	500216
Stereotaktische Apparatur	Kopf Instruments	Modell 900
Vannas Schere	Welt Präzisionsinstrumente	500086