$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Etablierung des Infarkts im Pons
- Heizen Sie das Heizkissen unmittelbar vor der Anästhesie vor.
- Befestigen Sie den Schädelbohrer an der Halterung am stereotaktischen Rahmen.
- Intraperitoneale Injektion der Ratten mit 50 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin. Überprüfen Sie, ob die Zehen nicht zusammendrücken.
- Montieren Sie die Ratte in Bauchlage auf den stereotaktischen Rahmen. Positionieren Sie die Ohrbügel über dem Gehörgang, um den Kopf zu sichern. Stellen Sie sicher, dass der Schädel horizontal gehalten wird, um eine Verzerrung der Injektion zu vermeiden.
- Aufrechterhaltung der Anästhesie mit Isofluran (100 % Sauerstoff, 2,5 % Isofluran) über einen stereotaktischen Nasenkonusaufsatz für Ratten mit Einlass- und Auslassöffnungen. Verwenden Sie ein Heizkissen, um die Temperatur auf 37 °C zu halten, und überwachen Sie sie während des gesamten Eingriffs.
- Verwenden Sie Augensalbe, um ein Austrocknen der Hornhaut zu verhindern. Kneifen Sie die Pfoten mit einer Pinzette zusammen, um sicherzustellen, dass keine leichte Schmerzreaktion auftritt.
- Rasieren Sie die Haare des Schädels mit einem Mikrorasierer. Tragen Sie das chirurgische Chlorhexidin-Peeling kreisförmig auf, beginnend an der chirurgischen Schnittstelle und nach außen drehend.
- Machen Sie mit einem Skalpell einen 3 cm langen Schnitt in der Mittellinie von der Linie des bilateralen Canthus bis 0,5 cm hinter der hinteren Fontanelle, den ein chirurgischer Markierungsstift markieren sollte.
- Verwende ein Wattestäbchen, um Blut zu entfernen.
- Auf jeder Seite des Hautlappens sollte ein Stück chirurgisches Klebeband angebracht werden, um die Kopfhaut freizulegen (Abbildung 1).
- Entfernen Sie vorsichtig das Bindegewebe aus dem Schädelknochen mit einem Wattestäbchen, das in 0,9 % NaCl getaucht ist. Wenn es nicht entfernt wird, verfängt sich das Bindegewebe im Bohrer.
- Identifiziere das Bregma. Wählen Sie den zentralen Punkt des Bregmas als Ursprungspunkt und markieren Sie ihn mit einem schwarzen chirurgischen Markierungsstift mit feiner Spitze.
- Platzieren Sie einen Bohrer bei 6,0 mm AP, 2,0 mm ML (Bereich von 0,5 bis 3,0 mm, Abbildung 2A).
- Führen Sie die Kraniotomie (1 mm Durchmesser) mit einem automatischen Bohrer durch. Gehen Sie vorsichtig vor, da sich dieser Punkt in der Nähe der venösen Sinus befindet.
- Entfernen Sie den Bohrer aus dem stereotaktischen Rahmen.
- Platzieren Sie eine 22-G-Sonde mit isoliertem Mantel in den stereotaktischen Rahmen (Abbildung 3A). Die Sondenspitze sollte 2 mm über dem proximalen Ende der Schleuse platziert werden (Abbildung 3A, B; Abbildung 2B).
- Stellen Sie sicher, dass die Hülle 7 mm (7 mm DV, Abbildung 2B; Abbildung 1C).
- Schieben Sie die Sonde entlang der Schleuse (Abbildung 1D), bis sich die Spitze der Sonde 9 mm unter der Oberfläche des Gehirns befindet (Abbildung 2D).
- Schließen Sie die Elektroden an einen elektrischen Stimulator an (Abbildung 3C). Verbinden Sie die Anode mit der Sonde, wie in Abbildung 1D gezeigt. Verbinden Sie die Kathode mit den Ratten (normalerweise mit dem Ohr der Ratten).
- Schalten Sie den elektrischen Stimulator ein und stellen Sie die folgenden Parameter ein: Einzelimpulsbreite = 4.050 ms, Spannung = 50 V und Strom = 4 mA (Abbildung 3C). Während der elektrischen Stimulation zeigt die Ratte ein Zittern. In dieser Studie wurde das Gerät für Ratten, die für die Verhaltenstests, MRT und TTC verwendet wurden, nicht eingeschaltet.
- Lassen Sie die Sonde nach der Stimulation 5 Minuten lang in Position.
- Entfernen Sie die Sonde aus dem Gehirn (Abbildung 1F).
- Verwenden Sie Knochenzement, um die Kraniotomie abzudecken. Lassen Sie den Zement trocknen, bevor Sie die Wunde nähen.
- Vernähen Sie die Wunde mit 4-0 Polyamid-Nahtfilamenten. Binden Sie nach drei oder vier Stichen 2-1-1 chirurgische Standardknoten.
- Injizieren Sie den Ratten intraperitoneal Penicillin (0,25 ml, 80 IE verdünnt in 4 ml Kochsalzlösung), um eine Infektion zu verhindern.
- Injizieren Sie den Ratten subkutan Meloxicam in einer Dosis von 2 mg/kg und wiederholen Sie dies dann alle 24 Stunden.
- Überwachen Sie die Ratten alle 15 Minuten, bis sie vollständig wach sind, und setzen Sie sie mit einem Heizkissen in den Käfig zurück. Bieten Sie freien Zugang zu Nahrung und Wasser bis zum Opfer.
Anmerkung: Alle Eingriffe sollten den aseptischen Operationsprinzipien folgen. Ziehen Sie vor der Operation nach einem chirurgischen Peeling der Hände ein Peeling-Top, eine chirurgische Maske und sterile Handschuhe an. Bewahren Sie steriles Nahtmaterial immer im sterilen Bereich auf.
