Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Experimentelles Verfahren bei laserinduzierten Hirnverletzungen
- Betäuben Sie die Ratte mit einer Mischung aus 2% Isofluran in Sauerstoff, um eine spontane Beatmung zu ermöglichen. Überprüfen Sie, ob die Narkosetiefe ausreichend ist, indem Sie den Schwanz mit einer Pinzette einklemmen, um zu sehen, ob der Entzugsreflex fehlt.
- Halten Sie die Körperkerntemperatur der Ratte während des gesamten Versuchsverfahrens mit einem rektalen temperaturgeregelten Heizkissen auf 37 °C.
- Entfernen Sie lokale Haare mit einem Rasierer und desinfizieren Sie sie mit 70% Alkohol und 0,5% Chlorhexidingluconat. Wiederholen Sie den Desinfektionsschritt noch zweimal.
HINWEIS: Der chirurgische Schnitt sollte ca. 3 cm breit sein. Entfernen Sie Haare mindestens 2 cm um den Schnittbereich herum.
- Setzen Sie die Ratte in Bauchlage auf einen stereotaktischen Kopfhalter. Machen Sie einen 3 cm langen Schnitt, um die Kopfhaut seitlich zu reflektieren und den Bereich zwischen Bregma und Lambda freizulegen.
- Halten Sie die Anästhesie durch den Nasenkonus aufrecht.
- Verwenden Sie den Neodym-YAG (Nd-YAG)-Laser (Spitzenwellenlänge 1064 nm), um 50J x 10 Punkte mit einer Pulsdauer von 1 s auf den exponierten Bereich des Schädels über der rechten Hemisphäre zu verabreichen.
- Stellen Sie sicher, dass der lasererzeugende Teil des Geräts 2 mm vom belichteten Bereich entfernt ist, um einen Laserstrahl zu erzeugen. 50J x 10 Punkte wurden nach sorgfältiger Abwägung verschiedener Energie-/Oberflächenkombinationen ausgewählt. Diese Kombination ist effizient und führt nach der Verabreichung von weniger als einer Sekunde nicht zu einer Knochenzerstörung des Schädels.
HINWEIS: 2 mm ist der Abstand zwischen dem Anschluss des Laserstrahls (vom optischen Kabel, durch das er geführt wird) und dem Schädelknochen. Falls eine Fokussierlinse verwendet wird, sollte der Abstand unter Berücksichtigung des Neigungswinkels der Linse berechnet werden, um den Strahl in den gewünschten Schadensbereich zu fokussieren. Sorgen Sie für die richtige Sicherheit bei der Verwendung eines Lasergeräts, einschließlich einer angemessenen Schulung und eines Augenschutzes.
- Entfernen Sie die Ratte aus dem Gerät und verschließen Sie die Kopfhaut mit chirurgischen 3-0-Seidennähten.
- Brechen Sie die Anästhesie ab und bringen Sie die Ratte zur Genesung in ihren Käfig zurück. 0,1 ml 0,25 % Bupivacain lokal verabreichen, um die postoperativen Schmerzen unmittelbar nach der Operation zu reduzieren.
Anmerkung: Der gesamte Eingriff sollte bei korrekter Durchführung weniger als 5 Minuten dauern.
