Ein In-vitro-Modell der Dehnungsverletzung in humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Neuronen

Zusammenfassung

Quelle: Phillips, J. K. et al. Verfahren zur Hochgeschwindigkeits-Dehnungsverletzung von humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Neuronen in einem 96-Well-Format. J. Vis. Exp. (2018)

Dieses Video zeigt den Prozess der Induktion von Dehnungsverletzungen an humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Neuronen (hiPSCNs). Die Zellen werden in einer bodenlosen Multiwell-Platte entnommen, an der eine Silikonmembran befestigt ist. Kontrollierte mechanische Belastung wird auf die Membran ausgeübt, um eine Störung des Zytoskeletts und eine Schädigung der Zellmembran zu induzieren, wodurch ein Phänotyp einer Dehnungsverletzung in den Zellen induziert wird.

Protokoll

>1. Herstellung von Platten

1. Plasma behandeln Sie eine 96-Well-Platte mit einem 200-W-Plasmareiniger (siehe Materialtabelle) für 60 s bei hoher Leistung und platzieren Sie ihn mit der Unterseite nach oben in den Plasmareiniger. Prüfen Sie, ob durch das Fenster der Kammer ein violettes Leuchten sichtbar ist, das darauf hinweist, dass sich ein wirksames Plasma gebildet hat. Diese Bonding-Technik wurde von Sunkara et al. übernommen.
2. Legen Sie die Oberseite der Platte innerhalb von 60 s 20 min lang mit der Unterseite nach unten in 200 ml 1,5 % (3-Aminopropyl)-Triethoxysilan (APTES) in entionisiertes (DI) Wasser. Diese Lösung ist instabil: Bereiten Sie sie nicht länger als 60 s vor, bevor Sie die Platte einführen.
   Vorsicht: Arbeiten Sie mit APTES in einem Abzug.
3. Das Plasma behandelt eine extrahierte Silikonmembran im Plasmareiniger für 60 s bei hoher Leistung. Planen Sie die Plasmabehandlung so, dass sie nicht mehr als 5 Minuten vor Ablauf des Zeitraums von 20 Minuten in Schritt 1.2 abgeschlossen ist.
4. Positionieren Sie die plasmabehandelte Membran mit einer Pinzette auf einem 7,5 x 11 cm großen Rechteck aus Pergamentpapier. Richten Sie eine 7,5 cm x 11 cm x 0,5 cm große Aluminiumplatte auf dem unteren Teil der Plattenherstellungsklammer aus. Richten Sie die Silikonmembran und das Pergamentpapier mit einer Pinzette auf der Aluminiumplatte aus.
5. Entfernen Sie die Plattendeckel aus dem APTES-Bad und schütteln Sie die überschüssige Lösung ab. Tauchen Sie für 5 s in ein 200 mL DI-Wasserbad und schütteln Sie überschüssiges Wasser ab. Tauchen Sie für 5 s in ein anderes 200 mL DI-Wasserbad und schütteln Sie überschüssiges Wasser ab. Ersetzen Sie das Wasser in diesen Bädern, bevor Sie eine andere Plattenplatte eintauchen.
6. Verwenden Sie Druckluft, um die Plattenplatte vollständig zu trocknen.
7. Platzieren Sie die Plattenplatte im oberen Teil der Plattenherstellungsklemme. Schließen Sie vorsichtig die Plattenherstellungsklemme, um die Plattenplatte und das Silikon zusammenzudrücken. Klemmen Sie für mindestens 1 h.
8. Lassen Sie die Platte vor Gebrauch 24 Stunden bei Raumtemperatur staubgeschützt aushärten.

>2. Dehnen einer Platte

1. Reinigen Sie die Eindringkörper
   1. Bereiten Sie ein 60-W-Ultraschallgerät mit DI-Wasser bei Raumtemperatur vor.
   2. Stützen Sie den Eindringkörper über dem Ultraschallbad ab, so dass nur die Spitzen der Eindringkörper bis zu einer Tiefe von mindestens 1 mm eingetaucht sind. Beschallen Sie die Eindringkörper 8 Minuten lang bei 42 kHz.
   3. Föhnen Sie die Eindringkörper mit Druckluft trocken.
2. Ausrichten des Eindringkörperblocks
   1. Positionieren Sie eine Kamera mit einem Live-Feed über dem Streckgerät, sodass sie auf das Eindringarray blickt. Konzentrieren Sie sich auf die Oberseiten der Eindringkörper.
      Anmerkung: Der in Abschnitt 3, "Charakterisierung der Membrandehnung" beschriebene Aufbau ist ein möglicher Kameraaufbau für diese Aufgabe.
   2. Befestigen Sie eine Platte mit den Tischklemmen auf dem Tisch des Verletzungsgeräts (Abbildung 1) und platzieren Sie eine Innenleuchte über dem Gerät.
      Anmerkung: In der Materialtabelle finden Sie die Software zur Gerätesteuerung.
   3. Starten Sie die Gerätesteuerungssoftware, indem Sie auf das Softwaresymbol auf dem Desktop des Computers klicken, der das Verletzungsgerät steuert. Führen Sie das Projekt "in_vitro_neurotrauma.lvproj" aus, indem Sie im Startfenster darauf klicken. Starten Sie im Projektfenster die virtuellen Instrumente (VIs) für Bewegungssteuerung und Positionsverfolgung, die die Namen "motion_control.vi" bzw. "position_tracker.vi" haben, indem Sie auf sie doppelklicken.
   4. Schließen Sie den Käfig, der die Verletzungsvorrichtung umgibt. Drücken Sie die Pfeiltaste in der oberen linken Ecke des Motion-Control-VI, um das VI auszuführen, und klicken Sie auf "Near Bottom", um den Tisch auf 2 mm nach dem Kontakt mit den Eindringkörpern abzusenken. Klicken Sie auf die Schaltfläche 'Stop', um VI.
      zu stoppen Vorsicht: Halten Sie die Hände von der Trage fern, wenn Sie die Kamera im Käfig manipulieren. Der Käfig sollte mit einem Türschalter ausgestattet sein, der die Dehnungsvorrichtung nur dann mit Strom versorgt, wenn die Käfigtür geschlossen ist.
   5. Klicken Sie im Projektfenster mit der rechten Maustaste auf "Achse 1". Klicken Sie auf "Interaktives Testpanel". Stellen Sie im sich öffnenden Fenster die Schrittweite auf 50 μm ein, indem Sie im Feld "Zielposition" "500" Einheiten eingeben.
   6. Klicken Sie wiederholt auf die grüne Schaltfläche "Go" am unteren Rand des Fensters "Interaktives Testfeld", bis die Platte zum ersten Mal mit Eindringkörpern in Berührung kommt. Überprüfen Sie, ob der Kontakt auf dem von der Kamera angezeigten Live-Bild angezeigt wird. Beachten Sie die vertikale Tischposition, die oben links im Fenster "Interaktives Testpanel" angezeigt wird. Dies ist die erste Kontaktposition.
   7. Senken Sie weiter ab (wie in Schritt 2.2.6 beschrieben), bis jede Vertiefung Kontakt mit den Eindringkörpern aufgenommen hat. Bewegen Sie bei Bedarf die Kamera, um die gesamte Platte zu sehen, und bewegen Sie den Tisch nach oben (durch Angabe einer negativen "Zielposition") und nach unten. Beachten Sie die vertikale Bühnenposition, die oben links im Fenster angezeigt wird, wenn alle Beiträge in Kontakt sind (dies ist die vollständige Kontaktposition).
   8. Beachten Sie den Unterschied zwischen der Position des ersten Kontakts und der Position des Vollkontakts. Schließen Sie das 'Interaktives Testpanel'. Führen Sie das 'Motion Control VI' aus (siehe Schritt 2.2.4) und klicken Sie auf 'Top', um die Bühne anzuheben. Stoppen Sie das Motion-Control-VI mit der Taste "Stop".
   9. Sobald sich der Tisch am oberen Ende seines Verfahrwegs befindet, öffnen Sie die Tür, um das Gerät zu deaktivieren. Stellen Sie die Stellschrauben an den Ecken des Eindringkörperblocks ein. Lösen Sie die Stellschraube an der Ecke, die zuerst Kontakt hatte, um sie abzusenken, und ziehen Sie die gegenüberliegende Schraube fest, um die Ecke anzuheben, die zuletzt Kontakt hatte.
   10. Wiederholen Sie den Vorgang des Absenkens des Tisches, bis die Platte die Eindringkörper berührt, überprüfen Sie die Kontaktbilder auf Neigung, heben Sie den Tisch an und stellen Sie den Eindringkörper ein (Schritt 2.2.9). Wenn Tisch und Block ausgerichtet sind, nehmen alle Eindringkörper gleichzeitig Kontakt auf.
   11. Öffnen Sie die Tür, um das Gerät zu deaktivieren. Stecken Sie die Zurrschrauben in ihre Löcher am Eindringkörper und ziehen Sie sie fest. Vergewissern Sie sich, dass der Block waagerecht mit den Befestigungsschrauben ist (Schritte 2.2.4-2.2.8). Notieren Sie sich die Tischposition, die vom "Interaktiven Prüffeld" gemeldet wird, wenn die Platte berührt wird. Dies ist die Nullposition für Eindringexperimente.
3. Schmieren Sie die Eindringkörper
   1. Wenn der Eindringkörper gerade erst aufgestellt und noch nicht geschmiert wurde, reinigen Sie ein Vollgummipad (7,5 cm x 11 cm x 1,5 mm) und ein weiches, geschlossenzelliges Moosgummipad (7,5 cm x 11 cm x 3 mm) mit einem ethanolgetränkten Labortuch. Lassen Sie sie an der Luft trocknen.
   2. Tränken Sie ein Labortuch in Maisöl und verteilen Sie es auf dem Vollgummipolster, bis es einen stumpfen Glanz hat.
   3. Legen Sie das Schaumstoffpolster auf das Vollgummipolster, um Öl auf das Schaumstoffpolster zu übertragen. Legen Sie eine 7,5 cm x 11 cm x 0,5 cm große Aluminiumplatte auf die Schaumstoffplatte und beladen Sie sie mit einem Ballastgewicht von ca. 360 g (z. B. 6 konische Rohre mit je 45 mL Wasser), um eine gleichmäßige Übertragung des Öls von der Vollgummiunterlage auf die Schaumstoffunterlage zu gewährleisten. Warten Sie 10 s, bis das Öl auf die Schaumgummiauflage übergegangen ist.
   4. Bewegen Sie das Moosgummipad auf das Eindringkörperarray. Legen Sie die Aluminiumplatte und das Ballastgewicht darauf, um eine gleichmäßige Übertragung des Öls auf die Spitzen der Eindringkörper zu gewährleisten. Lassen Sie 10 s warten, bis das Öl auf die Eindringkörper gelangt ist.
   5. Wenn seit dem ersten Einrichten und Schmieren des Eindringkörpers keine Platte gedehnt wurde, ist eine Prüfplatte zu dehnen, bevor Sie mit dem Versuch beginnen. Hinweis: Dadurch wird vermieden, dass Inkonsistenzen zwischen der ersten Dehnung und den nachfolgenden Dehnungen das Experiment verwirren. Wiederholen Sie für nachfolgende Dehnungen nur die Schritte 2.3.2 bis 2.3.5 vor jeder Dehnung.
4. Dehnen Sie einen Teller
   1. Schmieren Sie die Eindringkörper wie in Schritt 2.3 beschrieben.
   2. Befestigen Sie die Platte mit den Tischklemmen auf dem Tisch der Verletzungsvorrichtung. Wenn Sterilität erforderlich ist, passen Sie die Position des Deckels an, um die Platte zu sichern, ohne die Kulturoberfläche der Raumluft auszusetzen.
   3. Senken Sie den Tisch mit dem "Motion Control VI" auf die Nullstellung ab (siehe Schritte 2.2.4-2.2.6); die Nullstellung wird in Schritt 2.2 bestimmt.
   4. Ändern Sie den Dateinamen im Feld "Dateipfad" im "Positionsverfolgungs-VI" in einen eindeutigen Dateinamen und führen Sie ihn dann mit der Schaltfläche "Pfeil" in der oberen linken Ecke des Fensters aus.
   5. Stellen Sie die Tiefe und Dauer des Eindrucks (typischerweise 1-4 mm bzw. 30 ms, maximale Tiefe 5 mm, minimale Dauer 15 ms) in den Feldern "Verletzung (mm)" und "Verletzungsdauer (ms)" in der "Bewegungssteuerung VI" ein, indem Sie auf die Felder klicken und die gewünschten Werte eingeben.
   6. Führen Sie das "Bewegungsbedienfeld VI" aus und klicken Sie auf "Verletzen", um die Platte einzurücken.
   7. Verschieben Sie die Bühne an den oberen Rand ihres Reises, indem Sie auf "Oben" klicken. Stoppen Sie dann das VI mit der "Stop"-Taste und deaktivieren Sie die Verletzungsvorrichtung, indem Sie die Tür öffnen.
   8. Überprüfen Sie die Verschiebungshistorie des Tisches, die im "Positionstracker VI" angezeigt wird, um zu bestätigen, dass die angegebene maximale Verschiebung angewendet wurde. Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf das Diagramm und klicken Sie auf "Nach Excel exportieren". Klicken Sie auf 'Datei| Speichern", um die Daten zu speichern.

>3. Charakterisierung der Membrandehnung

1. Malen Sie die Aussparung am oberen Rand jedes Eindringkörpers weiß, um einen kontrastreichen Hintergrund für Hochgeschwindigkeitsvideos zu schaffen. Achtung: Lackieren Sie die Felgen der Eindringkörper nicht dort, wo sie mit den Platten in Berührung kommen.
2. 3D-Druck mit Polymilchsäure (PLA) oder anderweitige Herstellung eines zylindrischen Stempels, mit dem in jeder Vertiefung ein Punkt gemacht wird. Der Zylinder hat einen Durchmesser von 5,9 mm und eine Höhe von 12,2 mm, mit einem zylindrischen Vorsprung von 1,5 mm Durchmesser und einer Höhe von 1,0 mm, der oben zentriert ist.
3. Das Plasma behandelt die Platte mit der rechten Seite nach oben, um die Oberfläche der Silikonzellkultur in den Vertiefungen für 60 s zu aktivieren, wie in Schritt 2.1 beschrieben.
4. Legen Sie die Platte auf eine Gummiunterlage oder eine andere weiche Oberfläche. Grundieren Sie den kleinen Überstand auf dem Stempel (siehe Schritt 1.2) mit Tinte von einem Permanentmarker. Setzen Sie den Stempel in die zu testende Vertiefung ein und klopfen Sie, um eine gute Übertragung der Tinte zu gewährleisten. Grundieren Sie den Stempel vor jeder Vertiefung.
5. Richten Sie den Eindringkörper aus und schmieren Sie die Eindringkörper der Verletzungsvorrichtung (siehe Schritte 2.2-2.3). Klemmen Sie die Platte auf den Tisch der Verletzungsvorrichtung. Positionieren Sie ein helles, diffuses axiales Licht über der Verletzungsvorrichtung.
6. Stellen Sie eine Hochgeschwindigkeitskamera auf einem Galgenstativ über dem Verletzungsgerät auf, zeigen Sie gerade nach unten, wobei das Objektiv auf die kleinste Blendenzahl eingestellt ist, und schalten Sie es ein. Starten Sie die Kamerasoftware auf dem Computer, der mit der Kamera verbunden ist. Wählen Sie im Dropdown-Menü "Bildrate" die Option "2.000 Bilder pro Sekunde" und im Dropdown-Menü "Verschluss" die schnellste Belichtungszeit aus, die kontrastreiche Bilder liefert. Mitte über den gestrichelten Brunnen.
   1. Positionieren Sie die Kamera so, dass das Sichtfeld 12 Vertiefungen in einem 3 x 4-Raster enthält.
      Anmerkung: Dieses Sichtfeld bietet einen optimalen Kompromiss zwischen Durchsatz und Auflösung für ein Bild mit 1.280 × 1.024.
7. Senken Sie die Platte bis zum Nullpunkt ab (siehe Schritte 2.2.4-2.2.6). Klicken Sie einmal auf die Aufnahmetaste in der Kamerasoftware, sodass "Trigger In" angezeigt wird. Starten Sie den Positionstracker VI (Schritt 2.4.4).
8. Schalten Sie das helle, diffuse axiale Licht ein. Die Platte wie in Schritt 2.4.6 beschrieben eindrücken.
9. Schalten Sie das helle, diffuse axiale Licht aus.
10. Suchen Sie auf dem Kamerasteuerungscomputer das 30-40-ms-Fenster der Aufnahme, in dem die Einrückung auftritt: Ziehen Sie die Anfangs- und Endpfeile in der Hochgeschwindigkeits-Videowiedergabeleiste in der Kamerasoftware. Klicken Sie auf Speichern, geben Sie den Namen im Feld "Dateiname" ein, wählen Sie "TIFF" im Feld "Format" und klicken Sie auf "Speichern".
    1. Schauen Sie durch die . TIF-Dateien für Bilder des am wenigsten gedehnten (Anfang) und am stärksten gedehnten (Peak Indentation) Zustands.
    2. Um die Höhe und Breite der Punkte in beiden Bildern zu messen, verwenden Sie Fidschi, um die Bilder der kleinsten und der höchsten Dehnung nebeneinander zu öffnen. Klicken und ziehen Sie mit dem standardmäßigen rechteckigen Auswahlwerkzeug, um einen Rahmen um einen Punkt im Bild mit der geringsten Streckung zu zeichnen. Messen Sie die Höhe und Breite mit 'Analysieren| Messen".
    3. Wiederholen Sie den Vorgang für den Punkt in derselben Vertiefung auf dem Peak-Stretch-Bild. Wiederholen Sie den Vorgang für den Rest der Vertiefungen.
11. Berechnen Sie die Lagrange-Dehnung in x- und y-Richtung wie folgt:
    
    Anmerkung: Hier ist E_xx die Lagrange-Dehnung in x-Richtung, E_yy ist die Lagrange-Dehnung in y-Richtung, X ist die Breite des Punktes, Y ist die Höhe des Punktes, _f bezeichnet das endgültige Bild (d. h. das Peak-Einrückungsbild) und _i bezeichnet das Anfangsbild (d. h. das Bild vor der Einrückung). Mitteln Sie die beiden Werte, um die Dehnung in diesem Brunnen zu bestimmen.

>4. Plattieren der kultivierten Zellen

1. Autoklavieren Sie die Behälter und Ballastgewichte, die für die Sterilisation verwendet werden.
2. Die Platten mit Silikonboden werden 60 s lang mit der rechten Seite nach oben plasmabehandelt (siehe Schritt 1.1). Tauchen Sie die Platten sofort für 15 Minuten in sterile Behälter mit 70 % Ethanol
.
3. Tauchen Sie die Platten 30 Minuten lang in sterile phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in separate sterile Behälter.
4. Aspirieren Sie das PBS aus den Vertiefungen. Trocknen Sie jeweils nur eine Platte, um zu verhindern, dass die Vertiefungen die Plasmabehandlung verlieren.
   Vorsicht: Platten mit Silikonboden bieten beim Pipettieren ein geringeres taktiles Feedback als starre Platten und blockieren mit größerer Wahrscheinlichkeit die Spitze einer Pipette.
5. Geben Sie 100 μl 0,1 mg/ml Poly-L-Ornithin (PLO) pro Vertiefung in die sterilisierten Platten. 1 h bei Raumtemperatur inkubieren.
6. Spülen Sie die Vertiefungen zweimal mit 100 μl sterilem PBS und lassen Sie die zweite Wäsche auf den Vertiefungen, bis die Zellsuspension fertig ist.
7. Nehmen Sie die Durchstechflasche mit hiPSCNs mit Schutzhandschuhen aus der Lagerung von flüssigem Stickstoff und legen Sie sie auf Trockeneis. Transportieren Sie das Fläschchen schnell in ein 37 °C heißes Wasserbad und tauen Sie es genau 3 Minuten lang auf. Schwenken Sie die Durchstechflasche nicht.
8. Übertragen Sie den Inhalt des Fläschchens in einer sterilen Haube vorsichtig mit einer serologischen 1-ml-Pipette in ein konisches 50-ml-Röhrchen.
9. Spülen Sie das leere Kryofläschchen mit 1 ml vollständigem Erhaltungsmedium (Medienbasis + Ergänzung) bei Raumtemperatur.
10. Übertragen Sie den 1 ml des Mediums tropfenweise mit etwa einem Tropfen pro Sekunde in das 50-ml-Röhrchen. Schwenken Sie das Rohr vorsichtig, während Sie es hinzufügen. Geben Sie 8 mL vollständiges Erhaltungsmedium bei Raumtemperatur mit ca. 2 Tropfen/s in das 50 ml-Röhrchen.
11. Verschließen Sie das Röhrchen und drehen Sie es 2-3 Mal um. Zählen Sie die Zellen mit einem Hämozytometer. Berechnen Sie das Volumen des zusätzlichen Mediums, das erforderlich ist, um die Zellsuspension auf 225.000 Zellen/ml zu verdünnen.
12. Pipettieren Sie die Menge des Mediums (oben berechnet) vorsichtig mit einer serologischen 25-ml-Pipette in das Röhrchen mit der Zellsuspension.
13. Fügen Sie 10 μl 1 mg/ml Lamininstamm pro 1 ml Zellsuspension mit einer 1.000 μl Mikropipette hinzu, um 10 μg/ml Laminin in der Zellsuspension zu erreichen. Aspirieren Sie einmal mit der für Laminin verwendeten Spitze auf und ab, verschließen Sie dann das Röhrchen und drehen Sie das Röhrchen einmal um.
14. Saugen Sie das PBS aus den Platten an, eine Platte nach der anderen. Verwenden Sie eine Mehrkanalpipette, um 100 μl der hiPSCN-Zellsuspension in jede Vertiefung zu geben. Die Wells haben eine Kulturfläche von 0,33 cm², so dass die Zelldichte pro Fläche 67.500 Zellen/cm² beträgt.
15. Lassen Sie die Platten nach der Aussaat 15 Minuten lang bei Raumtemperatur ruhen, um die Anhaftung zu fördern. Um Lüftervibrationen der sterilen Kulturhaube zu vermeiden, stellen Sie die abgedeckten Platten auf den Labortisch. Inkubieren Sie die Kulturen bei 37 °C mit 5 % CO₂.
16. Führen Sie einen vollständigen Medienwechsel nach 24 Stunden durch und füllen Sie die Vertiefungen mit 200 μl vollständigem Erhaltungsmedium auf. Führen Sie alle 2-3 Tage einen halben Medienwechsel von 100 μl/Vertiefung durch.

>5. Kulturen verletzen

1. Richten Sie den Eindringkörper aus und suchen Sie die Nullposition, wie in Schritt 2.2 beschrieben. Schmieren Sie die Eindringkörper wie in Schritt 2.3 beschrieben.
2. Legen Sie den Dateinamen für die Verschiebungshistorie im 'Positionstracker VI' fest (Schritt 2.4.4). Stellen Sie die Verletzungsparameter in der 'Motion Control VI' (Schritt 2.4.5) ein.
3. Nehmen Sie die zu verletzende Platte aus dem Inkubator und klemmen Sie sie auf die Bühne. Passen Sie die Position des Deckels an, um die Platte zu sichern, ohne die Kulturen der Raumluft auszusetzen.
4. Senken Sie die Platte mit dem "Motion Control VI" auf den Nullpunkt ab (Schritte 2.2.4-2.2.6). Starten Sie den 'Positionstracker VI' (Schritt 2.4.4).
5. Verwenden Sie die Bewegungssteuerung VI, um die Platte einzurücken (wie in Schritt 2.4.6 beschrieben). Überspringen Sie bei Scheindehnungen nur diesen Schritt.
6. Bringen Sie den Tisch wieder an den oberen Rand seines Bewegungsbereichs (siehe Schritt 2.4.7). Stellen Sie die Platte wieder in den Inkubator.
7. Überprüfen und speichern Sie die Verschiebungsspur (wie in Schritt 2.4.8).

Ergebnisse

Abbildung 1: Ein beschriftetes Schema des Verletzungsgeräts.(A) Draufsicht, (B) isometrische Ansicht, (C) Vorderansicht, (D) rechte Seitenansicht. Die Maßstabsleiste gilt für die orthogonalen Ansichten (A, B und D).

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
.010" Silikon Folie	Specialty Manufacturing, Inc	#70P001200010	Polydimethylsiloxan (PDMS)-Platte
Funkeln	Fisher Scientific	#043204
Nunc 256665	Fisher Scientific	#12-565-600	Bodenlose 96-Well-Platte
Kim Tücher	ULINE	Nr. S-8115
Plasma-Reiniger	Harrick Plasma	#PDC-001-HC
(3-Aminopropyl)triethoxysilan	Sigma-Aldrich	#440140	APTES
Pergamentpapier	Reynolds	N/A
Lichtkuppel	CCS inc	LFX2-100SW
Stromversorgung für Dome Light	CCS inc	PSB-1024VB
Axiale diffuse Beleuchtungseinheit	Siemens	Nerlite DOAL-75-LED	Diffuses axiales Licht
Hochleistungs-LED-Array	Cree	XLamp-CXA2540	Hochleistungs-LED-Array
LED-Halterung	Molex	1807200001	LED-Halterung
LED-Stromversorgung	Gemein gut	HLG-320H-36B	Konstantstrom-Stromversorgung
FastCam Viewer-Software	Photron		Kamera-Softeware
Fastcam Mini UX50	Photron	N/A	Hochgeschwindigkeits-Kamera
Micro-NIKKOR 105mm f/2.8	Nikon	#1455	Hochgeschwindigkeits-Kameraobjektiv
0,1 mg/ml Poly-L-Ornithin	Sigma-Aldrich	#P4597
iZellen	Zelluläre Dynamik International	#NRC-100-010-001
iCell-Medien	Zelluläre Dynamik International	#NRM-100-121-001
iCell Ergänzung	Zelluläre Dynamik International	#NRM-100-031-001
Laminin	Sigma-Aldrich	#L2020
Aktuator für Schwingspule	BEI Kimco	LA43-67-000A
Optischer Längenencoder	Renishaw	T1031-30A
Servoantrieb	Copley-Steuerungen	Xenus XTL
Controller	Nationale Instrumente	cRIO 9024 Echtzeit-PowerPC-Steuerung
cRIO-Fahrwerk	Nationale Instrumente	cRIO 9113
Digitales Eingangsmodul	Nationale Instrumente	NI 9411
Gehäuse für die Datenerfassung	Nationale Instrumente	NI 9113
LabVIEW	Nationale Instrumente
hiPSCNs	Zelluläre Dynamik International