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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Etablierung der Resiniferatoxin (RTX) Neuropathie
VORSICHT: RTX ist neurotoxisch und gefährlich. Bei Kontakt wirkt es reizend auf die Augen, die Schleimhäute und die oberen Atemwege. Vermeiden Sie Inhalationen und tragen Sie während der RTX-Vorbereitung eine Laborbrille und einen Kittel. Bei Hautkontakt oder nach der Handhabung mit viel Wasser abspülen.
- Geben Sie 1 mg RTX-Pulver zu einer 200-μl-Mischung mit gleichem Volumen aus Tween 80 und absolutem Ethanol (100 μl für jedes Lösungsmittel).
- Aliquotieren Sie die RTX-Lösung (12 μl/Fläschchen) und lagern Sie sie bis zu 3 Monate lang bei -20 °C. Dies ist der RTX-Bestand; Verwerfen Sie die verbleibende RTX-Lösung nach Ablauf.
- Verdünnen Sie den RTX-Stamm mit normaler Kochsalzlösung auf ein Endvolumen von 600 μl. Die Endkonzentration der RTX-Lösung sollte 0,01 % betragen, was 1 μg RTX in 10 μl Fahrzeuglösung entspricht.
- Verwenden Sie 8 Wochen alte adulte männliche ICR-Mäuse (35-40 g) als Versuchstiere und verabreichen Sie den Mäusen intraperitoneal (Dosis: 200, 50 bzw. 10 μg/kg) eine Einzeldosis RTX-Lösung (Dosis: 200, 50 bzw. 10 μg/kg) mit einer Mikroinjektionsspritze. Die Mäuse wurden durch einen Inhalator mit 5 % Isofluran für eine tiefe Anästhesie betäubt. Wenn Mäuse während der RTX-Injektion eine Entzugserscheinung der Extremitäten zeigten, sollten Mäuse eine längere Inhalation der Anästhesie benötigen.
Beispiel: Wenn die Maus 40 g wiegt, erhält sie 20 μl der RTX-Lösung, was der Dosis von 50 μg/kg entspricht.
- Einer Gruppe von Mäusen wird das gleiche Volumen des Vehikels (10 % Tween 80 und 10 % absolutes Ethanol in Kochsalzlösung) als Kontrolle verabreicht.
- Nach der RTX-Injektion werden die Mäuse in einem 12-stündigen Licht-/12-Stunden-Dunkelzyklus in einen Kunststoffkäfig zurückgebracht und nach Belieben mit Futter und Wasser versorgt.