Eine Technik, um Drosophila-Fliegen ein Schädel-Hirn-Trauma zuzufügen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Sun, M., et al. Eine neuartige Methode zur Modellierung der chronischen traumatischen Enzephalopathie bei Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Zufügung einer traumatischen Verletzung mit geschlossenem Kopf bei anästhesierten Drosophila-Fliegen mit einer Angriffsvorrichtung mit einem gasbetriebenen Impaktor. Die Verletzung beeinträchtigt die neuronale Funktion und beeinträchtigt die Gehfähigkeit.

Protokoll

>1. Montage der Schließvorrichtung (Abbildung 1)

Entfernen Sie den Kolben von einer 1-ml-Tuberkulinspritze. Schneiden Sie das Fass bei der 1-ml-Markierung.
Entfernen Sie eine Aerosolbarriere (3 mm Höhe x 4 mm Durchmesser) von einer 200 μL-Pipettenspitze und verwenden Sie sie als Impaktor. Setzen Sie den Schlagkörper in den Spritzenzylinder ein. Klopfen Sie vorsichtig auf den Lauf, um den Schlagkörper zum Spitzenende zu bewegen, wobei die flache Seite die Düsenöffnung bedeckt.
Befestigen Sie das Zylinderspitzenende an einem Kunststoffschlauch, der mit dem Kohlendioxid (_{CO 2})-Durchflussregler einer Drosophila-Anästhesiestation verbunden ist.
Halten Sie den Lauf senkrecht und klemmen Sie ihn an einen Standard-Klemmhalterständer, so dass der Schlagkörper am Boden des Laufs bleibt.
Modifizieren Sie eine 200-μl-Pipettenspitze, um den Fliegenhalter herzustellen.
1. Schneiden Sie 4 mm von der Spitze ab, um eine Öffnung mit einem Durchmesser von 0,8 mm zu erhalten, so dass nur der Fliegenkopf freigelegt werden kann.
  HINWEIS: Der Thorax und alle anderen Teile des Fliegenkörpers verbleiben in der Pipettenspitze.
Modifizieren Sie eine 1.000-μl-Pipettenspitze und eine 1-ml-Spritzennadelkappe, um den Anschluss herzustellen.
1. Schneiden Sie 44 mm von der Öffnung der Spitze ab. Nehmen Sie eine 6 mm lange 1-ml-Spritzennadelkappe und schieben Sie sie fest in das verbleibende Segment der 1.000-μl-Pipettenspitze.

>2. Betrieb der Schließvorrichtung

Betäuben Sie eine einzelne 2 Tage alte erwachsene weibliche Fliege mit CO₂ auf einem Fliegenpad.
Übertragen Sie es vorsichtig mit einer feinen Bürste auf den Fliegenhalter. Klopfen Sie vorsichtig auf den Halter, so dass der Fliegenkopf außerhalb des Spitzendes zu sehen ist. Wenn der Fliegenrüssel außerhalb der Spitze freiliegt, stecken Sie ihn vorsichtig mit einer abgestumpften 1-ml-Spritzennadel wieder in die Spitze.
Anmerkung: Achten Sie darauf, dass sich der Rüssel in der Halterung befindet. Andernfalls kann die Fliege an einer Verletzung des Saugrüssels sterben.
Ziehen Sie den Fliegenhalter mit dem Konnektor so am Spritzenzylinder fest, dass der Fliegenkopf nach unten zeigt.
Stellen Sie den Gasdruck auf 100 kPa ein. Passen Sie die Durchflussrate entsprechend dem Versuchsdesign an.
Schalten Sie den Kippschalter des Durchflussreglers schnell ein und aus, so dass der Prallbrecher einmal auf den Fliegenkopf trifft.
Hebe den Fliegenhalter an und schiebe ihn über ein Fliegenpad. Drehen Sie den Fliegenhalter um und klopfen Sie vorsichtig auf die Seite, um den Flügel herauszulassen. Lassen Sie die Fliege in einer leeren Durchstechflasche, um sie zu erholen.

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Ergebnisse

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Abbildung 1. Diagramm der Schließvorrichtung. Das Gerät verwendete Materialien, die in einem Drosophila-Labor leicht verfügbar sind: 1) 200 μl Pipettenspitze, 2) 1 mL Tuberkulinspritze, 3) Impaktor, 4) Verbindungsschlauch, der an eine Drosophila-Anästhesiestation angeschlossen ist, und 5) Verbindungsstück, um die Spitze mit der Spritze festzuziehen.