Etablierung eines Mausmodells für hypoxisch-ischämische Hirnverletzungen bei Neugeborenen

Zusammenfassung

Quelle: Kim, M., et al. Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal hypoxic-ischämische Hirnverletzungen. J. Vis. Exp. (2017).

Das Video zeigt das Verfahren zur Erstellung eines Mausmodells zur Untersuchung von hypoxisch-ischämischen Hirnverletzungen bei Neugeborenen. Es beschreibt die Schritte zur chirurgischen Induktion einer Ischämie und zur Unterwerfung des Tieres unter Hypoxie, um die Hirnschädigung zu verschlimmern. Schließlich wird gezeigt, wie die resultierenden Hirnläsionen beurteilt werden können, um sicherzustellen, dass das Mausmodell für weitere wissenschaftliche Untersuchungen vorbereitet wird.

Protokoll

Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.

>1. Mausmodell für HI-Hirnverletzungen bei Neugeborenen

1. Betäuben Sie die Welpen mit Isofluran.
   1. Legen Sie die Welpen (weniger als 5) in eine Betäubungsbox und schließen Sie den Deckel.
   2. Schalten Sie das Anästhesiesystem für ca. 15 Minuten ein; stellen Sie das Gas und das Isofluran mit einem Tischanästhesiegerät ein. Stellen Sie den Sauerstoffdurchflussmesser auf 1,5 l/min ein. Stellen Sie den Isofluran-Verdampfer auf 3-5% ein, um die Anästhesie einzuleiten.
   3. Stellen Sie den Isofluran-Verdampfer nach 15 Minuten auf 1-2% ein, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten.
2. Legen Sie einen vollständig betäubten Welpen unter ein Seziermikroskop (Bauch zum Forscher gewandt) und befestigen Sie ihn mit Klebeband.
3. Machen Sie mit einer sterilisierten Schere einen ~0,7 mm großen Schnitt im Nacken.
4. Entfernen Sie vorsichtig das Fettgewebe mit einer sterilisierten Pinzette und legen Sie die einseitige rechte Halsschlagader frei.
5. Lilizieren Sie die einseitige rechte Halsschlagader mit einer resorbierbaren 5-0-Naht.
6. Vernähen Sie den Schnitt am Hals mit einer 5-0-Naht.
7. Setzen Sie jeden Welpen für 1 h in eine 37 °C warme hypoxische Kammer zur Erholung. Schließen Sie den Kammerdeckel nicht.
8. 1 h nach der Operation, wenn die Welpen vollständig wach sind, schließen Sie den Deckel der Hypoxiekammer und verringern Sie die Gaswerte, um hypoxische Bedingungen zu etablieren (8% O₂ und 92% N₂).
9. Nach 90 Minuten Hypoxie bringen Sie die Welpen in ihre Käfige zurück.
10. Wiederholen Sie eine Woche nach der HI-Hirnverletzung Schritt 1.
    1. Nach der Narkose wird mit einer sterilisierten Schere und Pinzette ein Schnitt in die Kopfhaut gesetzt, um die Hirnläsion im posterolateralen Bereich der rechten Hemisphäre zu identifizieren.
       Anmerkung: Diese Behandlung induziert Hypoxie bei Welpen. Das Vorhandensein und Ausmaß der Hirnverletzung bei allen Mäusen wird mit bloßem Auge durch den halbtransparenten Schädel visuell beurteilt. Abhängig von der Größe oder dem Volumen der Verfärbung (d. h. der Hirnläsion) werden die Jungtiere in Gruppen eingeteilt. Liegt keine sichtbare kortikale Verletzung vor, wird die Maus in die Gruppe "keine kortikale Verletzung" eingeteilt. Liegt eine sichtbare kortikale Verletzung vor (d.h. eine Läsion in der rechten Hemisphäre), wird die Maus in die Gruppe der "kortikalen Verletzungen" eingeteilt. Da die Einteilung der Mäuse in Gruppen eine Woche nach der Operation erfolgt, können die Gruppierungen geändert werden, wenn die Morphologien der Gehirnproben zum Zeitpunkt der Tötung klar definiert sind.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Hypoxische Kammer	Jeung Do Bio & Plant Co	Experimenteller Builder
Harvard Apparat Fluovac Anästhesiesystem	Harvard-Apparatur
Betäubungs-Box			Acryl-Box
I-Fran Flüssigkeit (Isofluoran)	Verifizierter Lieferant - Hana Pharm. Co., Ltd.		Allgemeinanästhetika (Isofluran 100ml)
CD-1-Mäuse	Orient Co., Ltd.
Blau Nylon Mono Nicht resorbierbares Naht 5-0 50cm	Verifizierter Lieferant - Ailee Co., Ltd.	NB 521