Generierung eines Mausmodells mit einer Infektion des Zentralnervensystems

Zusammenfassung

Quelle: Shen, T., et al. Ein Mausmodell der Dengue-Virus-induzierten akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Erkrankung. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt die Generierung eines Mausmodells mit einer ZNS-Infektion. Einem säugenden Welpen wird das Virus sowohl intrakraniell als auch intraperitoneal injiziert. Das Virus breitet sich aus, infiziert das ZNS und verursacht neuronalen Zelltod und Entzündungen. Der Welpe wird im Verlauf der Krankheit auf Symptome einer Infektion untersucht.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Ablauf der Infektion

1. Bereiten Sie nicht angepasste DENV2-Bestände (Stamm PL046) vor9 (ursprünglich von den Centers for Disease Control in Taiwan bezogen, im Bereich von 2,5 x 10⁷ bis 1 x 10⁹ PFU/ml).
2. Verdünnen Sie den Virusfond auf 1 x 10⁶ PFU mit Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium auf ein Gesamtvolumen von 40 μl.
3. Eine 0,3-ml-Spritze mit einer 30-g-Nadel mit 10 μl (2,5 x 10⁵ PFU) verdünntem Virus und eine weitere 0,3-ml-Spritze mit einer 30-g-Nadel mit 30 μl (7,5 x 10⁵ PFU) verdünntem Virus füllen.
4. Halten Sie die 7 Tage alte Säugmaus des ICR (Institute of Cancer Research) fest und führen Sie die folgenden Schritte durch.
   1. Halten Sie die Maus für die intrazerebrale Injektion in Bauchlage, indem Sie die Ohrmuschel zwischen Zeigefinger und Daumen drücken, und injizieren Sie intrazerebral 10 μl verdünntes Virus in den Lambda-Bereich, den Punkt am Schnittpunkt der sagittalen und lambdoiden Naht.
   2. Halten Sie die Maus nach der intrazerebralen Injektion mit Zeigefinger und Daumen in Rückenlage und injizieren Sie vorsichtig 30 μl des verdünnten Virus intraperitoneal in den Abdomen der Maus.
      Anmerkung: Um Kannibalismus zu vermeiden, wird 75%iger Alkohol verwendet, um einen vorübergehenden Verlust des Geruchsempfindens der Mutter zu erzeugen. Zusätzlich wird empfohlen, die Streu mit dem Stuhl und Urin der Mutter zu bedecken.
5. Legen Sie die säugenden Mäuse zurück in ihre Käfige und warten Sie 5 Minuten, um ihre Sicherheit nach der Stimulation mit der Avidität von Mäusen zu überprüfen, einschließlich Gehen und Muttermilchsaugen.
   Anmerkung: In den meisten Fällen zeigen Mäuse eine normale Aktivität nach der Stimulation, und es scheint keine schädlichen Auswirkungen nach der technischen Herausforderung zu geben.
6. Bewerten Sie den täglichen Fortschritt der Mäuse in Bezug auf das Körpergewicht (unter Verwendung einer Mikrogramm-Waage), die akute virale Enzephalitis-ähnliche Erkrankung (durch Krankheitsbewertung wie in Abschnitt 2 beschrieben) und die Überlebensrate.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Roswell Park Memorial Institute 1640 mittel (RPMI)	Gibco	Artikel-Nr.: 11875-085	Virus verdünnen
0,3-ml-Insulinspritze	BD Ultra-FineII	328838	Intrazerebrale und intraperitoneale Injektion
Mikrowaage	LabX von METTLER TOLEDO	AL104	Gewicht Maus
Nicht adaptiertes DENV2 (Stamm PL046)	Die Zentren für die Kontrolle von Krankheiten in Taiwan	-	Maus infizieren
Säugemäuse des Institute of Cancer Research (ICR)	Verifizierter Lieferant - BioLASCO Taiwan Co., Ltd	-	Unser Mausmodell