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Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.
>1. Abrieb der Mausfußballen
- Betäuben Sie eine C57BL/6-Maus (5–7 Wochen alt) mit einem Isofluran-Gasanästhetikum, das in einer Dosierung von 3% über ein kleines Anästhesiesystem (Kammer) verabreicht wird.
- Platzieren Sie die Maus in der chirurgischen Anästhesieebene auf dem Rücken vor der Inokulation im hinteren Fußballen. Befestigen Sie einen Nasenkegel mit einem Zwerchfell (ein Schlitz, der ausreichend groß ist, um in die Schnauze des Tieres zu passen) an die Maus und verabreichen Sie das Isofluran-Gasanästhetikum in einer konstanten Dosierung von 1,5 % bis 2,0 %.
- Überwachen Sie die Maus genau auf eine Reaktion auf schmerzhafte Reize, die durch kräftiges Einklemmen des Zehs mit einer Pinzette entstehen.
- Fassen Sie einen hinteren Fußballen leicht mit einer flachen Pinzette.
- Schleifen Sie die kahle Haut des hinteren Fußpolsters zwischen Ferse und Gehpolstern etwa 20x vorsichtig mit einem Schmirgelbrett (Körnung 100–180) ab. Verursachen Sie keine Blutungen, indem Sie zu häufig abreiben oder zu viel Druck ausüben.
- Ziehen Sie mit einer feinen Pinzette langsam das durch Abrieb abgelöste Stratum corneum ab, um das Stratum basale freizulegen.
>2. PRV-Fußpolster-Inokulation
- Bereiten Sie das auf den gewünschten Titer verdünnte Virusinokulum in DMEM-Medien vor, die 2 % fötales Rinderserum (FBS) und 1 % Penicillin/Streptomycin enthalten (Materialtabelle).
- Quantifizieren Sie die Anzahl der plaquebildenden Einheiten (PFU) im Virusbestand auf PK15-Zellen, um die Virusdosis zu berechnen und zu standardisieren und das virale Inokulum entsprechend zu verdünnen.
Anmerkung: In dieser Studie wurde ein virulenter PRV-Stamm (PRVBecker) in einer Dosis von 8 x 106 PFU verwendet. Diese Dosis wurde in einem vorangegangenen Vorversuch optimiert, um sicherzustellen, dass alle geimpften Tiere 82 h nach der Inokulation (hpi) klinische Symptome zeigten.
- Bewahren Sie das Virus-Inokulum auf Eis auf und mischen Sie es vor Gebrauch vorsichtig an.
- Geben Sie einen 20-μl-Tropfen Virusinokulum (8 x 106 PFU) auf den abgeschürften Fußballen (topische Verabreichung). Führen Sie parallel Scheinimpfungen (nur Medium) durch.
- Reiben Sie 10x vorsichtig mit dem Schaft einer Nadel, um die Adsorption des Virus zu erleichtern. Vermeiden Sie Kratzen mit der Nadelspitze. Wiederholen Sie diesen Schritt alle 10 Minuten.
- Halten Sie die Maus 30 Minuten lang unter Narkose, bis der abgeriebene Fußballen trocken ist.
- Überwachen Sie die Maus nach Beendigung der Anästhesie, bis sie die sternale Liege halten kann, und legen Sie sie zur klinischen Nachsorge und Probenahme in einen Einzelkäfig.