Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Schmitz, K., et al. Biolumineszenz und Nahinfrarot-Bildgebung von Optikusneuritis und Hirnentzündung im EAE-Modell der Multiplen Sklerose bei Mäusen. J. Vis. Exp (2017).

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese Infiltration setzt eine Signalkaskade in Gang, die schließlich zu einer Myelinschädigung führt, die den demyelinisierenden Zustand der Multiplen Sklerose nachahmt.

Protokoll

>1. EAE-Induktion bei SJL/J-Mäusen

1. Mäuse
   1. Verwenden Sie 11 Wochen alte weibliche SJL/J-Mäuse und lassen Sie sie sich etwa 7 Tage lang an den Versuchsraum gewöhnen. Verwenden Sie n = 10 Mäuse pro Gruppe.
   2. Um die Wirkung der Medikation zu beurteilen, verabreichen Sie das Medikament und das Placebo für die Kontrollgruppe ab 3 oder 5 Tagen nach der Immunisierung kontinuierlich über Trinkwasser oder Futterpellets (n = 10 pro Gruppe). Verabreichen Sie während des Höhepunkts der Krankheit Medikamente oder Placebo mit Milch oder 3% Zuckerwasser getränkten Cornflakes.
2. Material für die Immunisierung
   1. Verwenden Sie ein EAE-Induktionskit, bestehend aus Antigen (Peptid des Proteolipidproteins, PLP139-151, 1 mg/ml-Emulsion) in einer Emulsion mit vollständigem Freund-Adjuvans (CFA, hitzeabgetötetes Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) und 2 Fläschchen (je 5 μg) lyophilisiertem Pertussistoxin (PTX).
   2. Lösen Sie das PTX (2 μg/ml) in 1x phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS, d. h. geben Sie 1,5 mL PBS in jedes PTX-Röhrchen, mischen Sie es gut, entfernen Sie es mit derselben Pipettenspitze und fügen Sie es zu 1 mL PBS in einem 50-ml-Röhrchen hinzu); mischen Sie es gut.
3. Immunisierung
   1. PLP/CFA subkutan in 2 Portionen à 100 μl injizieren, beide an der Basis des Schwanzes.
   2. Injizieren Sie zweimal pro Maus 100 μl PTX intraperitoneal (i.p.), die erste 1 - 2 h nach der Immunisierung und die zweite nach 24 h.
   3. Für die Kontrollmäuse injizieren Sie CFA ohne PLP (2 Portionen à 100 μl) plus PTX ohne PLP.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
PLP139-151/CFA-Emulsion	Hooke Labs, St. Lawrence, MA	EK-0123	EAE-Induktionskit
Pertussis-Toxin	Hooke Labs, St. Lawrence, MA	EK-0123	EAE-Induktionskit
IVIS Lumina Spektrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA		Biolumineszenz- und Infrarot-Bildgebungssystem
LivingImage 4.5 Software	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	CLS136334	IVIS-Analysesoftware
Isofluran	Abbott Labs, Illinois, USA	Artikel-Nr.: 26675-46-7	Betäubungsmittel