Generierung eines Mausmodells für ein Schädel-Hirn-Trauma mit Hilfe eines lateralen Flüssigkeitsperkussionsgeräts

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Tierpflege

1. Verwenden Sie in diesem Experiment 5 bis 6 Wochen alte männliche C57BL/6J-Mäuse (20-25 g Gewicht).
2. Halten Sie die Mäuse in einem Hell-Dunkel-Zyklus von 12 Stunden/12 Stunden und stellen Sie sicher, dass sie Futter und Wasser ad libitum erhalten. Stellen Sie sowohl der Schein- als auch der SHT-Gruppe während der gesamten Studie die gleichen Mengen an Nahrung und Wasser zur Verfügung.
3. Bemühen Sie sich nach Kräften, die Schmerzen und Beschwerden der Tiere zu minimieren.

>2. Induktion eines Schädel-Hirn-Traumas

1. Injizieren Sie Ketamin (80-100 mg/kg)/Xylazin (10 mg/kg) IP zur Anästhesie. Testen Sie die Narkosetiefe mit einem Augenreflex oder Schmerzreflex. Verwenden Sie künstliche Tränen oder Gleitmittel für die Augen, um die Augen vor dem Austrocknen zu bewahren.
2. Bringen Sie die Maus nach der Anästhesie in Bauchlage. Verwenden Sie ein temperaturgesteuertes Heizkissen, um die Temperatur während der Operation und 30 Minuten nach dem SHT auf 37 °C zu halten.
3. Rasieren Sie die Haare im Schnittbereich.
4. Desinfizieren Sie die Kopfhaut mit 70% Ethanol in drei abwechselnden Peelings und schneiden Sie die Kopfhaut dann in einer sagittalen Ebene ein.
5. Ziehen Sie den Schnitt mit einer Pinzette auf beiden Seiten zurück und trennen Sie das Periost leicht.
6. Zeichnen Sie mit einem Marker einen Kreis (3 mm Durchmesser) auf den rechten Parietalbereich des Schädels, 2 mm von der Mittellinie entfernt.
7. Bohren Sie den Schädel mit einer elektrischen Bohrmaschine. Stellen Sie sicher, dass dieser Schritt sorgfältig ausgeführt wird, um die Dura vor Beschädigungen zu schützen.
8. Entfernen Sie den Knochenlappen und legen Sie ein kleines Knochenfenster (3 mm Durchmesser) frei.
9. Legen Sie eine plastische Verletzungskanüle (Innendurchmesser = 2,5 mm, Länge = 8 mm) über den Kraniotomie und zementieren Sie die Kanüle mit einem Dentalkunststoff am Schädel.
10. Füllen Sie die Kanüle mit einer Spritze (5 mL) mit sterilem 0,9 % NaCl (normale Kochsalzlösung), um sicherzustellen, dass sich keine Blasen in der Kanüle befinden.
11. Schalten Sie das Oszilloskop und den Verstärker ein und stellen Sie sicher, dass die Hochdruckröhre des LFPI-Geräts frei von Luftblasen ist. Testen Sie das Gerät, indem Sie etwa 10 Impulse abgeben, bis es ein gleichmäßiges Signal gibt. Stellen Sie den Winkel der Startposition des Pendels ein, um eine Impulsintensität von ca. 2,0 atm zu erreichen.
12. Verbinden Sie die Verletzungskanüle mit dem LFPI-Gerät. Induzieren Sie eine Hirnverletzung, indem Sie den Abzug betätigen und das Pendel loslassen. Nehmen Sie dann einen Impuls und übertragen Sie ihn durch das gesamte geschlossene, flüssigkeitsgefüllte Schlauchsystem an die Dura.
13. Operieren Sie die Mäuse in der Scheingruppe mit dem gleichen chirurgischen Eingriff. Führen Sie den LFPI nicht aus.