Cre-LoxP-vermittelte Induktion von zerebralen kavernösen Malformationen in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Choi, J. P., et al. Induktion und Mikro-CT-Bildgebung von zerebralen kavernösen Malformationen im Mausmodell. J. Vis. Exp. (2017)

In diesem Video wird ein genetisch veränderter Mauswelpe, der das Ccm2-Gen trägt, flankiert von loxP-Stellen und Cre-Rekombinase, die an einen Östrogenrezeptor fusioniert ist, verwendet, um zerebrale kavernöse Malformationen (CCMs) zu induzieren. Die Verabreichung von 4-Hydroxytamoxifen aktiviert Cre in Endothelzellen, was zur Deletion von Ccm2 und zur Bildung von CCMs im Gehirn führt.

Protokoll

Alle Verfahren mit Tiermodellen wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.

>1. Induktion von zerebralen kavernösen Malformationen oder CCMs in Mausmodellen

1. Kreuz Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl Mäuse mit Ccm2fl/fl zur Erzeugung von Würfen mit Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) Jungtiere und Wurfgeschwisterkontrollen (Ccm2fl/fl). Cdh5-CreErt2 und Ccm2fl/fl Tiere wurden bereits beschrieben19.
2. 4HT in 100%igem Ethanol auflösen und bei -80 °C in Aliquoten von 30 μl 4-Hydroxytamoxifen(4HT) lagern (Konzentration: 10 mg/ml). Am Tag der Anwendung aliquotiertes 4HT in Maisöl (0,5 mg/ml) verdünnen.
3. Intragastrische Injektion von 50 μl 4HT (0,5 mg/ml) an Neugeborene bei P1, um experimentelle CCM-Läsionen mit einer Insulinspritze zu induzieren.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
4-Hydroxy-Tamoxifen	Sigma-Aldrich	Nr. H6278	So aktivieren Sie Cdh5-CreErt2
Maiskeimöl	Sigma-Aldrich	Nr. C8267-500ML	Zur Verdünnung von 4-Hydroxytamoxifen
Insulin-Spritze