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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vorbereitung von Tieren
- Induzieren Sie eine Anästhesie durch intraperitoneale Injektion von Ketamin (70 mg/kg) und Xylazin (16 mg/kg). Halten Sie die normale Körpertemperatur aufrecht und tragen Sie zur schnellen Einleitung einer Tiefenanästhesie bei. Testen Sie auf eine adäquate Sedierung mit einem Schmerzreiz, wie z. B. einem Zehenkneifen, und überprüfen Sie, ob keine Reaktion vorliegt.
- Rasieren Sie die Nackenhaare der Maus vorsichtig mit einem Rasierer, reinigen Sie sie mit 70 % Ethanol, gefolgt von Betadin/Chlorhexidin und tragen Sie 1 % Lidocain auf die Hautoberfläche auf, um die Schmerzen lokal zu kontrollieren.
- Platzieren Sie die Maus in Rückenlage. Verwenden Sie Klebeband, um die Gliedmaßen und den Schwanz zu fixieren, und dehnen Sie die Haut des Halses sanft auf die gegenüberliegende Seite der Operation. Gleichzeitig den Hals leicht anheben.
- Verwenden Sie eine Augensalbe (z. B. 5% Dexpanthenol), um eine Austrocknung der Augen während der Operation zu verhindern.
>2. SAH-Induktion
- Öffnen Sie die Halshaut mit einem sterilen Skalpell vom Kinn bis zur Oberkante des Brustbeins (1,5 cm) und trennen Sie die Speicheldrüsen stumpf vom umgebenden Bindegewebe.
- Trennen Sie die Muskelgruppe entlang einer Seite [in diesem Fall der rechten Seite] der Luftröhre und legen Sie die Scheide der Arteria carotis communis (CCA) frei, die mit nährenden Blutgefäßen und Venolen bedeckt ist. Das CCA und die Nerven befinden sich in unmittelbarer Nähe zueinander.
- Dissoziieren Sie die CCA und lassen Sie eine kostenlose 8-0 Seidennaht um das CCA, ohne es vorher zu ligieren. Achten Sie auf den Schutz des Vagusnervs, da dieser leicht beschädigt werden kann (Abbildung 1A).
- Entlang des unteren hinteren Drittels der Diastase ist eine dreifache Bifurkation der CCA, der Arteria carotis interna (ICA) und der Arteria carotis externa (ECA) sichtbar. Präparieren Sie das distale Ende der ECA und ligieren Sie das Gefäß doppelt so weit wie möglich distaal.
- Trennen Sie die ECA in der Mitte des doppelt ligierten Segments, wodurch ein Gefäßstumpf entsteht.
- Ordnen Sie eine Ligatur für das Filament um den ECA-Stumpf vor, schließen Sie sie nicht, bis das Filament erfolgreich eingesetzt wurde.
- Verwenden Sie eine Naht oder einen Mikroclip, um ICA und CCA vorübergehend zu verschließen (Abbildung 1B).
- Machen Sie mit einer mikrovaskulären Schere einen kleinen Schnitt (etwa die Hälfte des ECA-Durchmessers) in die ECA. Setzen Sie ein 5-0 (alternativ 4-0) Prolene-Filament in die ECA ein und schieben Sie es in die CCA vor.
- Schließen Sie die Ligatur an der ECA leicht, während Sie den Mikroclip an der ICA und CCA lösen (Abbildung 1C).
- Ziehen Sie das Filament vorsichtig zurück und stellen Sie den ECA-Stumpf in kranialer Richtung ein, wobei Sie das Filament durch die Bifurkation in den ICA einführen (Abbildung 1D).
- Richten Sie die Filamentspitze medial in einem Winkel von ~30° zur Trachealmittellinie und ~30° zur horizontalen Ebene. Schieben Sie das Filament nach vorne in den ICA. Nach Erreichen der Bifurkation der vorderen Hirnarterie (ACA)-der mittleren Hirnarterie (MCA) tritt ein Widerstand auf (~9 mm).
- Schieben Sie das Filament 3 mm weiter vor und perforieren Sie den rechten ACA. Ziehen Sie das Filament sofort in den ECA-Stumpf zurück, damit das Blut in den Subarachnoidalraum fließen kann.
- Halten Sie das Filament etwa 10 s lang in dieser Position (Abbildung 1E). Das Vorhandensein von Muskelzittern, ipsilateraler Miosis, Atemnot, verändertem Herzrhythmus und Harninkontinenz kann ein Beleg für eine erfolgreiche Operation sein.
- Schließen Sie vorübergehend die CCA, um übermäßigen Blutverlust zu vermeiden. Ziehen Sie das Filament sofort heraus und ligieren Sie die ECA mit der zuvor vereinbarten Naht. Öffnen Sie das CCA wieder und lassen Sie eine Reperfusion und einen weiteren Bluterguss in den Subarachnoidalraum zu (Abbildung 1F).
Nachdem Sie auf - Blutungen überprüft haben, desinfizieren Sie die Haut um die Wunde, um postoperative Hautinfektionen zu vermeiden, und nähen Sie die Wunde mit einem nicht resorbierbaren 4-0-Polyesterfasernaht.
- Lege die Maus in eine Thermobox, bis das Bewusstsein wiedererlangt ist. Warten Sie, bis das Tier vollständig wach ist, und stellen Sie sicher, dass es wieder genügend Bewusstsein erlangt hat, um das Brustbein aufrecht zu erhalten. Geben Sie die Tiere nicht in die Gesellschaft anderer Mäuse zurück, bis sie sich vollständig erholt haben.
- Verabreichen Sie 200-300 mg/kg Körpergewicht Paracetamol zur postoperativen Schmerzlinderung.
- Kontrollieren Sie die Mäuse täglich nach der Operation.
