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In Reaktion auf virale Infektion, entwickelt eine Vielzahl verschiedener Abwehrreaktionen, wie die Aktivierung angeborenen Immunsystems Signalwege, die die antivirale Zytokin-Produktion 1,2 führen. Um den Host besiedeln, sind Viren obligat zu Host Reaktionen antiviralen entziehen und zu manipulieren Signalwege. Die Aufklärung der Wirt-Virus-Interaktion wird Licht auf die Entwicklung neuartiger therapeutischer Strategien gegen virale Infektionen zu vergießen.
Murine γHV68 ist eng mit menschlichen onkogenen Kaposi-Sarkom-assoziierten Herpesvirus und Epsten-Barr-Virus 3,4 verwandt. γHV68 Infektion in Mäusen eine tractable kleinen Tiermodell, um den gesamten Verlauf der Host Reaktionen und viralen Infektion in vivo, die nicht verfügbar sind für den menschlichen Herpesviren untersuchen. In diesem Protokoll, präsentieren wir ein Panel von Methoden zur phänotypischen Charakterisierung und molekulare Zerlegung des Host-Signalisierungs-Komponenten in γHV68 lytische replication in vivo und ex vivo. Die Verfügbarkeit von genetisch veränderten Mausstämmen erlaubt die Abfrage der Rollen von Host Signalwege während γHV68 akute Infektion in vivo. Darüber hinaus können embryonale Maus-Fibroblasten (MEF) aus diesen defizienten Mäusen isolierten Stämme zur weiteren sezieren Rolle dieser Moleküle während γHV68 lytische Replikation ex vivo werden.
Mit virologische und molekularbiologische Tests, können wir ermitteln den molekularen Mechanismus der Wirt-Virus-Interaktionen und identifizieren Host und viralen Gene essentiell für lytischen Replikation. Schließlich erleichtert ein bakterielles künstliches Chromosom (BAC)-System die Einführung von Mutationen in den viralen Faktor (en), die spezifisch unterbrechen die Wirt-Virus-Interaktion. Rekombinante γHV68 Durchführung dieser Mutationen können die Phänotypen der γHV68 lytische Replikation in MEFs Mangel an wichtigen Host Signalkomponenten rekapitulieren werden.Dieses Protokoll bietet eine exzellente Strategie, um Wirt-Pathogen-Interaktion auf mehreren Ebenen der Intervention in vivo und ex vivo zu verhören.
Kürzlich haben wir entdeckt, dass γHV68 usurpiert eine angeborene Immunsystem Signalweg zur lytischen Replikation 5 zu fördern. Insbesondere aktiviert γHV68 de novo Infektion das Immunsystem Kinase IKK und aktiviert IKK phosphoryliert den Master viralen Transkriptionsfaktor, Replikation und Transaktivator (RTA), um virale Transkriptionsaktivierung zu fördern. Dabei γHV68 effizient Paare ihre Transkriptionsaktivierung zu angeborenen Immunaktivierung hosten, wodurch Transkription und viralen lytische Replikationsursprung. Diese Studie liefert ein hervorragendes Beispiel, die andere Viren angewendet werden kann, um Wirt-Virus-Interaktion zu verhören.