Sympathische Denervierung der Nierenarterien in einem Angiotensin-II-induzierten Hypertonie-Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Wang, M., et al., Verbesserte renale Denervierung milderte Hypertonie, die durch Angiotensin-II-Infusion induziert wurde. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur sympathischen Denervierung der Nierenarterie in einem Angiotensin-II-induzierten hypertensiven Mausmodell, bei dem Phenol verwendet wird, um die Funktion des sympathischen Nerven zu stören und den Blutdruck zu senken.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Bilaterale renale Denervation

1. Wählen Sie die Mäuse mit erhöhtem Blutdruck (BP) ≥140/90 mmHg oder 25 % Anstieg des systolischen BP/diastolischen Blutdrucks 1 Woche nach der Ang II-Infusion aus.
2. Erfassen Sie das Tiergewicht vor der Operation und wählen Sie Tiere mit einem Mindestgewicht von 24 g für die Nierendenervierungsoperation.
3. Betäuben Sie die Mäuse mit Natrium-Pentobarbital. Bestätigen Sie die Narkosetiefe mit einem negativen Zehenkneifreflex.
4. Entfernen Sie die Haare am Bauch mit einem Rasierer. Führen Sie diesen Eingriff sorgfältig und gründlich durch, um eine chirurgische Kontamination zu vermeiden.
5. Legen Sie die Mäuse auf den Operationstisch, halten Sie den Bauch oben und fixieren Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Desinfizieren Sie die Bauchhaut mit Povidon-Jod, gefolgt von drei Tüchern mit 70% Ethanol.
6. Machen Sie mit einer Skalpellklinge einen 2 cm langen Bauchschnitt an der ventralen Mittellinie. Ziehen Sie den Darm mit in 37 °C Kochsalzlösung getränkter Gaze zurück, um die linke Nierenarterie freizulegen. Präparieren Sie das Fett vorsichtig, aber unverblümt mit einer gebogenen Pinzette von der Nierenarterie weg. (Abbildung 1A-C).
7. Schneiden Sie das Wägepapier mit einer sterilen, scharfen Schere in ein Rechteck in der Größe der Nierenarterie. Schneiden Sie das Wiegepapier als Referenz in der gleichen Größe zu, wie durch die gestrichelte Linie in Abbildung 1C gezeigt.
   HINWEIS: Es ist ein kritischer Teil der Operation, zu versuchen, mehrere Stücke des Wägepapiers auf einmal zu schneiden, um die gleiche Form zu erhalten.
8. Tauchen Sie das Wägepapier mindestens 30 s lang in eine 10%ige Phenol/Ethanol-Lösung. Decken Sie die Oberfläche der linken Nierenarterie ab und umwickeln Sie das Gefäß mit dem Wiegepapier und halten Sie es 2 Minuten lang (Abbildung 1D). Verwenden Sie Gaze, um das umgebende Gewebe zu schützen, um zu verhindern, dass das Wägepapier die umgebende Niere und den Darm berührt.
   HINWEIS: Die Phenollösung ist in Kunststofftuben stabil, aber nicht in Glasfläschchen. Daher muss die Lösung für jedes Experiment frisch zubereitet werden.
9. Führen Sie das gleiche Verfahren für die rechte Nierenarterie durch. Führen Sie die Scheinoperation mit in Kochsalzlösung getauchtem Wägepapier durch.
10. Positionieren Sie die Muskeln wieder in ihre Ausgangsposition und schließen Sie das Bauchfell mit 6-0 Vicryl-Nähten in einer unterbrochenen Naht. Verschließen Sie dann die Haut mit unterbrochenen 4-0-Nylonnähten. Überwachen Sie alle Mäuse, bis sie vollständig genesen sind.

2. Nachsorge

1. Tragen Sie Povidon-Jod auf den Schnitt auf und legen Sie das Tier zur Genesung und postoperativen Überwachung in eine erwärmte Heizdecke.
2. Überwachen Sie die Mäuse zweimal täglich, um sie auf Rötungen, Schwellungen und Schmerzen oder Bauchinfektionen zu beurteilen. Meloxicam (0,5 mg/kg, SC) wurde allen Mäusen etwa 1 h vor und 24 h nach dem RDN-Verfahren verabreicht.

Ergebnisse

Abbildung 1: Verfahren der RDN mit Wägepapier. (A,B) Anatomische Bilder der Nierenarterie von C57BL/6 (ex vivo) Mäusen. (C) Der Teil innerhalb der beiden gestrichelten Linien bezieht sich auf die Fläche, die vom Wägepapier abgedeckt wird. (D) Abdecken der Oberfläche der beidseitigen Nierenarterie mit dem entsprechenden Wägepapier, das in ei...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Angiotensin II	Sangon Biotech	CAS:4474-91-3	Um ein hypertensives Animol-Modell zu erstellen
Blutdruckanalyse	Visitech Systems	BP-2000	Messen Sie den Blutdruck von Mäusen
Mini-Osmosepumpe	DURECT Corporation	CA 95014	Zum Auffüllen mit Angiotensin II
Wägepapier	Sangon Biotech	F512112	Zur Zerstörung des Nierennervs mit mit Wägepapier, das in Phenol getaucht ist; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.