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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Etablierung eines unilateralen Modells für Verschluss/Reperfusion der mittleren Hirnarterie (MCAO/R) bei Ratten
HINWEIS: Während der Operation verwenden Sie die Mikrozange vorsichtig, um einen Bruch des Blutgefäßes zu verhindern. Vermeiden Sie Schäden an den Nerven und anderen Blutgefäßen im Hals der Ratte, wenn das Gefäß isoliert wird. Es muss darauf geachtet werden, dass für alle überlebenschirurgischen Eingriffe eine geeignete aseptische Technik vorgestellt wird. Die Technik, die später im Video veranschaulicht wird, sollte während des gesamten Verfahrens geübt werden.
- Halten Sie die Körpertemperatur der Ratten während der gesamten Operation in einem Kleintierthermostat auf 37,0 ± 0,5 °C. Bereiten Sie vier 6 cm 5-0 Nähte vor.
- Stellen Sie den Sauerstoffdurchfluss eines Kleintieranästhesiegeräts (mit einem Abgasbehandlungsgerät) auf 0,4-0,6 l/min und die Konzentration von Isofluran auf 5 % ein. Lege die Ratte in das Anästhesiegerät.
- Nachdem das Tier ohnmächtig geworden ist, legen Sie die Ratte auf einen chirurgischen Fixiertisch. Verbinden Sie den Mund der Ratte mit der Maske des Anästhesiegeräts (die Sauerstoffflussrate bleibt unverändert; stellen Sie die Isoflurankonzentration auf 3% ein). Bestätigen Sie, dass das Tier in eine tiefe Narkose eingetreten ist, indem Sie einen Mangel an Verspannungen der Extremitäten, Hornhautreflexe und Schmerzen beobachten.
- Fixiere seine Gliedmaßen mit Papierverbänden (oder anderen Werkzeugen) so, dass sie auf dem Operationstisch liegen.
- Entfernen Sie das Halsfell mit einem Elektrorasierer und sterilisieren Sie es mit 75% Alkohol (Iodophor ist besser). Fixiere das Maul der Ratte mit einem Haken.
- Schneiden Sie mit einer Augenschere 2-3 cm entlang der zentralen Längsform des Halses ein.
- Trennen Sie die Arteria carotis communis. Trennen Sie den Unterhautmuskel mit einer Augenzange. Verwenden Sie einen selbstgebauten Retraktor, um das Sichtfeld vollständig freizulegen. Nach der Trennung des vorderen Muskels der Luftröhre mit einer ophthalmischen Zange wird entlang der rechten Sternocleidomastoideussehne getrennt, bis die Arteria carotis communis sichtbar ist.
- Isolieren Sie die Arteria carotis communis, die Arteria carotis externa und die Arteria carotis interna mit einer Augenzange. Lizieren Sie die Arteria carotis communis (harter Knoten), die Arteria carotis externa weit vom Herzende entfernt (harter Knoten) und die Arteria carotis interna (lockerer Knoten) mit 5-0 Nähten. Die äußere Halsschlagader in der Nähe des Herzendes mit 5-0-Nähten auslegen.
- Setzen Sie eine Gewindeschraube ein. Schneiden Sie mit einer Augenschere eine kleine Öffnung in die äußere Halsschlagader und setzen Sie vorsichtig einen Gewindebolzen ein. Lilizieren Sie die Naht der Arteria carotis externaus, die sich in einem lockeren Knoten befand, und schneiden Sie die Arteria carotis externa ab.
- Lösen Sie den losen Knoten der Arteria carotis interna und führen Sie den Fadenbolzen weiter bis zum Anfang der Arteria cerebrales media ein (Naht markiert). Schneiden Sie dann die freiliegende Gewindeschraube ab.
- Nach Erreichen der ischämischen Zeit (2-3 h) fixieren Sie die Fraktur der Arteria carotis externa mit einer Mikrozange und ziehen Sie den Gewindebolzen vorsichtig mit einer anderen Mikrozange heraus. Wenn das vordere Ende des Gewindebolzens vollständig aus der Arteria carotis interna herausgezogen ist, ligieren Sie die Arteria carotis externa, die mit 5-0-Nähten ausgekleidet war, und ziehen Sie dann den Gewindebolzen vollständig heraus.
- Lockern Sie die Arteria carotis communis und tupfen Sie ~50.000 U Penicillin-Natriumpulver auf die Oberfläche der Wunde, um eine Infektion zu verhindern. Naht der subkutanen Muskeln und der Haut mit 4 Nähten.
- Geben Sie der Ratte ~0,2 ml sterile Kochsalzlösung oral mit einer 1-ml-Spritze (SQ-PEN-Injektion ist besser), um postoperativen Wassermangel zu vermeiden, nachdem Sie die Ratte wieder in den Käfig gesetzt haben.