Beurteilung der Muskelkontraktion mit neuromuskulärer Blocker-Behandlung

Zusammenfassung

Quelle: Lin, C. U., et al., In-vitro-Neuromuskuläre Verbindung, induziert aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen. J. Vis. exp. (2020)

Dieses Video zeigt die Beurteilung des Muskels mit kultivierten Motoneuronen, Schwann-Zellen und Myotuben, gefolgt von einer Behandlung mit einem neuromuskulären Blocker zur Hemmung der Kontraktion. Farbcodierte Zeit-Bewegungs-Grafiken zeigen eine farbcodierte Zeit-Bewegungs-Grafik. Rot steht für die schnellste Bewegung und Blau für die langsamste.

Protokoll

1. Behandlung von Muskelkontraktionen und Kuren

1. Um die Kontraktion der Myotuben auszulösen, geben Sie 25 mM Calciumchlorid (CaCl₂) in das Kulturmedium. Die Bewegung der Myotuben kann in 1\u20122 min beobachtet werden.
2. Stellen Sie die 6-Well-Platte auf den Tisch eines inversen Mikroskops. Nehmen Sie einen Film der Kontraktion der Myotuben durch Lebendzellmikroskopie auf.
3. Um die Kontraktion der Myotuben zu stoppen, fügen Sie dem Kulturmedium Curare hinzu (300 ng/ml). Nehmen Sie dann den Film in Schritt 1.2 auf.
4. Öffnen Sie die Filmdatei mit der Software zur Analyse von Bewegungsvektoren, und klicken Sie dann auf die Taste "Bewegungsanalyse", um den Film zu analysieren.
   HINWEIS: Die Kontraktion der Myotuben wird als Zeit-Bewegungs-Grafik dargestellt. Die Filme sind farbcodiert, um die Bewegungsgeschwindigkeit der Myotuben zu zeigen. Die farbcodierten funkelnden Signale zeigen die Bewegungen der Myotuben an, wobei die rote Farbe die schnellste Bewegungsgeschwindigkeit und die blaue Farbe die langsamste Bewegungsgeschwindigkeit anzeigt.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Medium, Wachstumsfaktoren und Reagenzien	Artikel	Marke	Katze. Anzahl
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	FuE-Systeme	248-BD
	ECM, Matrigel (Wachstumsfaktor reduziert)	Corning	356230
	GDNF	FuE-Systeme	212-GD
	Ionen-Beschichter	JEOL	JEC3000FC
	Mikroskopie lebender Zellen	Nikon	Eclipse Ti Mikroskop
	Software zur Analyse von Bewegungsvektoren	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Neurobasales Medium	Gibco	21103-049
	NT3	FuE-Systeme	267-N3