Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.
1. Probanden
- Verwenden Sie männliche Sprague-Dawley-Ratten (250-300 g bei der Ankunft).
- Hausratten in Käfigen mit festem Boden in einem Kolonieraum mit einer Luftfeuchtigkeit von 40-60% und einer Raumtemperatur (RT) von 21 ± 1 °C.
- Wasser und Futter bei libitum zur Verfügung stellen.
- Halten Sie Ratten unter einem umgekehrten Dunkel-/Hell-Zyklus von 12:12 Uhr (Licht an um 20 Uhr).
2. Operation
- Bereiten Sie pro Ratte zwei Stücke chromischer Darmligatur (5-0) von ca. 6 cm Länge vor und legen Sie sie in sterile Kochsalzlösung, um ein Austrocknen und Steifheit und Sprödigkeit zu vermeiden.
- Betäuben Sie das Tier mit Pentobarbital (60 mg/kg, intraperitoneal [i.p.]) und behandeln Sie es mit Atropin (0,1 mg/kg, i.p.). Überwachen Sie den Grad der Anästhesie, indem Sie ein Bein ausstrecken und das Hautgewebe zwischen den Zehen mit einem Fingernagel einklemmen, um sicherzustellen, dass ausreichender Druck ausgeübt wird. Stellen Sie sicher, dass das Tier seine Gliedmaßen nicht beugt. Falls erforderlich, zusätzlich Pentobarbital verabreichen.
- Rasieren Sie den Kopf der Ratte so, dass ein Schnitt in der mittleren Kopfhaut von etwa 25 mm mit gleichen Abständen vor und hinter der Augenmitte vorgenommen werden kann.
- Fixieren Sie den Rattenkopf in einem stereotaktischen Rahmen oder fixieren Sie den Rattenkopf auf andere Weise. Lege die Ratte auf ein beheiztes Pad, um die Körpertemperatur zu halten.
- Tragen Sie Augensalbe auf beide Augen auf, um Schäden durch Austrocknen zu vermeiden.
- Schrubben Sie den rasierten Kopfbereich mit Alkohol und dann mit Betadin.
- Machen Sie einen Schnitt in der mittleren Kopfhautlinie, bei dem der Schädel und das Nasenbein freigelegt werden.
- Führen Sie die Schritte 2.9 bis 2.16 mit einem Operationsmikroskop aus.
- Präparieren Sie den Rand der Augenhöhle, der aus dem Oberkiefer-, Stirn-, Tränen- und Jochbein besteht, mit einem Wattestäbchen und einer Dumont-Pinzette. Verwenden Sie den Tupfer, um Blut von möglichen Blutungen aufzusaugen.
- Um Zugang zum Nervus infraorbitalis (IoN) zu erhalten, lenken Sie den Orbitalinhalt vorsichtig mit einem Präzisionswattestäbchen ab und achten Sie darauf, dass der Nervus themoidalis anterior, der oberhalb des IoN verläuft, nicht überdehnt wird. Präparieren Sie das IoN frei vom umgebenden Bindegewebe mit einem Präzisionstupfer mit Wattespitze und einer Dumont-Pinzette mit einer Spreizbewegung. Verwenden Sie den Tupfer, um Blut von möglichen Blutungen aufzusaugen.
- Um eine Ligatur durchzuführen, schieben Sie ein Ende eines einzelnen Stücks chromischen Darms entlang des Stirnknochens nach unten, medial zum IoN und schieben Sie einige Millimeter parallel und unterhalb des IoN vor. Die Ligatur wird nun zwischen dem IoN und dem Stirnbein an Ort und Stelle gehalten.
- Schieben Sie die Spitze einer 45 Grad abgewinkelten Dumont-Pinzette unter das IoN, um sie in unmittelbarer Nähe der Ligatur zu platzieren. Ziehen Sie das IoN vorsichtig seitlich zurück, um die Ligatur und die Spitze der Pinzette freizulegen. Fassen Sie die Ligatur mit der Pinzette und ziehen Sie die Pinzette seitlich unter dem IoN hervor.
- Ziehen Sie die Ligatur aus der Orbitalhöhle heraus, bis beide Enden der Ligatur mehr oder weniger gleich weit vom IoN entfernt sind.
- Machen Sie einen "Slip-Knoten" aus den beiden Enden der Ligatur, um eine perfekte Kontrolle über den Grad der Einschnürung zu ermöglichen, und schieben Sie den Knoten gegen das IoN. Schieben Sie den Knoten weiter, um das IoN zu verengen, so dass der Durchmesser des Nervs um einen gerade noch spürbaren Betrag reduziert wird. Machen Sie einen normalen Knoten auf dem Kettknoten, so dass der Grad der Einschnürung konstant bleibt (z.B. .,, um ein Verrutschen des Schlitzknotens zu verhindern).
- Schneiden Sie die Ligaturen so ab, dass ca. 2 mm freie Enden vom Knoten übrig bleiben.
- Wiederholen Sie den gleichen Vorgang (Schritte 2.11 bis 2.15), um eine zweite Ligatur im Abstand von 2 mm zur ersten herzustellen.
- Für die Scheinoperation führen Sie die Schritte 2.2 bis 2.10 durch.
- Verschließen Sie den Kopfhautschnitt mit Polyesternähten (4-0) und lassen Sie die Ratte auf einem beheizten Pad sich erholen. Lassen Sie das Tier nicht unbeaufsichtigt, bis es wieder genügend Bewusstsein erlangt hat, um das Brustbein aufrecht zu erhalten, und bringen Sie das Tier nicht in die Gesellschaft anderer Tiere zurück, bis es sich vollständig erholt hat.
- Um präventive analgetische Wirkungen auf die Entwicklung neuropathischer Schmerzen zu vermeiden, verabreichen Sie keine Analgesie bei postoperativen Schmerzen.