Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Generierung eines TNT-Modells (Tibianeurinom-Transposition) der Ratte. Nachdem der Nervus tibialis im Hinterbein einer anästhesierten Ratte freigelegt wurde, wird der Nerv durchtrennt. Legen Sie als Nächstes einen subkutanen Tunnel an, fädeln Sie den durchtrennten Nerv durch den Tunnel und nähen Sie ihn fest. In Ermangelung eines Ziels für die Reinnervation bilden unorganisierte axonale Auswüchse aus dem durchtrennten Nerv ein Neurom, das durch Erregung von Nozizeptoren neuropathische Schmerzen auslöst.
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Methodenartikel
Generierung eines Rattenmodells der Tibianeurom-Transposition
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28. April 2025
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.
1. Anästhesie und Vorbereitung
HINWEIS: Diese Studie wurde an 15 männlichen Sprague Dawley-Ratten durchgeführt, die 12 Wochen alt waren.
- Betäuben Sie die Tiere durch Induktion mit 5% Isofluran und halten Sie die Narkose mit 2%-3% Isofluran aufrecht.
HINWEIS: Die Aufrechterhaltung mit 2% Isofluran führt in der Regel zu einer ausreichenden Anästhesie und spontanen Atmung, ohne dass eine tracheale Intubation oder mechanische Beatmung erforderlich ist. - Überprüfen Sie die Reflexe der Tiere, indem Sie den Fuß mit einer Pinzette einklemmen. Vergewissern Sie sich, dass das Tier nicht ansprechbar ist, bevor Sie fortfahren. Rasieren Sie das Operationsfeld vom Knie bis zum Knöchel mit einem Elektrorasierer und tragen Sie Augensalbe auf die Augen auf, um Trockenheit zu vermeiden. Injizieren Sie 0,5 mg/kg analgetisches Carprofen subkutan in die Bauchregion.
- Legen Sie die anästhesierte Ratte auf den Rücken, den Kopf entweder nach links oder rechts gerichtet und das zu operierende Bein in der Nähe des Chirurgen. Exorotieren Sie die untere hintere Extremität, so dass der mediale Knöchel nach oben zeigt. Legen Sie die Ratte unter ein Stereo-Operationsmikroskop mit 6-facher Vergrößerung.
- Desinfizieren Sie den rasierten Bereich mit drei abwechselnden Runden Peeling auf Jodbasis, gefolgt von Alkohol. Legen Sie ein steriles Tuch mit einem Operationsloch über das Bein, so dass nur das Operationsfeld sichtbar ist. Stellen Sie sicher, dass diese sterilen Bedingungen während der Operation aufrechterhalten werden.
2. Chirurgie
- Legen Sie ein kleines Wattestäbchen unter den Knöchel, um das Operationsfeld waagerecht zu halten. Lokalisieren Sie das Knie und machen Sie vorsichtig einen Längsschnitt von 1-2 cm mit einem Skalpell über die mediale Seite der Hinterpfote von der Mitte der Wade bis zum Knöchel. Bei Bedarf die Haut und die Unterhaut mit einer Mikroschere weiter öffnen, bis die Muskelschichten sichtbar sind.
- Identifizieren Sie das oberflächliche neurovaskuläre Bündel als zwei oder drei weiße und eine dickere violette/rote Linie, manchmal mit kleinen Ästen, die sich frei über die Muskelschichten bewegen können. Mit einem Elektrokauter (siehe Materialtabelle) gerinnen aktive Blutungen oder Nässe im Operationsfeld. Achten Sie darauf, das neurovaskuläre Bündel nicht zu beschädigen.
- Präparieren Sie stumpf, um die Faszie zwischen den Gastrocnemius-Muskeln zu öffnen, direkt hinter dem oberflächlichen neurovaskulären Bündel von 2.2. Zwischen den Faszien der Muskeln befindet sich der Nervus tibialis. Der Nervus tibialis ist etwa dreimal so groß wie der oberflächliche Nerv im neurovaskulären Bündel. Verwenden Sie den Tibiaknochen als zusätzlichen Orientierungspunkt (der Nervus tibialis liegt direkt hinter dem Tibiaknochen).
- Identifizieren Sie den Nervus tibialis und seine Bifurkation.
HINWEIS: Die Bifurkation ist normalerweise mit einer helleren Linie in Längsrichtung über dem Nerv sichtbar. - Präparieren Sie den Nervus tibialis vorsichtig von den umgebenden Gefäßbündeln. Führen Sie die Dissektion durch, indem Sie den Nervus tibialis stumpf bewegen und das freiliegende Gewebe durchschneiden, das beim Bewegen des Nervus tibialis eine gewisse Dehnung zeigt.
HINWEIS: Wenn der Nervus tibialis nach der Dissektion an sich kreuzenden Venen befestigt wird, können diese Venen koaguliert werden, um den gesamten Nervus tibialis freizulegen. Achten Sie darauf, das Tibiabündel selbst nicht zu koagulieren. - Legen Sie den Nervus tibialis proximal frei, bis er unter einer sich kreuzenden Muskelschicht verschwindet. Zu diesem Zeitpunkt scheint der Nervus tibialis tiefer in die Hinterpfote in Richtung Knie einzutauchen. Legen Sie den Nervus tibialis distal bis zum Knöchel frei.
HINWEIS: Wenn der Nervus tibialis weiter distal freigelegt wird, nimmt die Menge an sich kreuzenden Kollagenfasern (d.h. Fasern senkrecht zur Richtung der Nervenfasern) zu. Diese Kollagenfasern müssen so geschnitten werden, dass sie genügend Länge für die Transponierung des Nervus tibialis haben.- Wenn der gesamte Nervus tibialis freigelegt ist, legen Sie die Muskelschichten zurück, um eine Austrocknung des Nervs zu vermeiden. Wenn der Nerv dehydriert (d.h. er wird steifer, stumpfer und faltiger) und eine Abdeckung mit Muskelschichten nicht ausreicht, fügen Sie Tropfen Kochsalzlösung hinzu, um ihn mit Feuchtigkeit zu versorgen.
- Mit einem stumpfen mikrochirurgischen Werkzeug, vorzugsweise einem Mikronadelhalter, wird die prätibiale Haut von der subkutanen Muskelschicht getrennt, um einen subkutanen Tunnel zu erstellen. Halten Sie dazu die Haut hoch und schieben Sie die stumpfe Spitze parallel zur Haut in das Gewebe. Stellen Sie sicher, dass sich das Ende des Tunnels prätibial oder eher seitlich befindet, um einen einfachen Zugang zum Bereich für die Untersuchung des Neuroms zu gewährleisten.
- Erhöhen Sie den Isofluran auf 5%. Kehren Sie zum Nervus tibialis zurück und legen Sie ihn frei (d.h. gehen Sie zurück an die in Schritt 2.6 beschriebene Stelle). Schneiden Sie den Nervus tibialis (d. h. beide Plantaräste) auf der distalsten Ebene in der Nähe des Knöchels durch. Senken Sie das Isofluran auf das normale Niveau von 2%-3%.
- Ändern Sie die Mikroskopvergrößerung auf 10x oder 16x. Identifizieren Sie das Epineurium des Nervus tibialis proximal des Schnitts in Schritt 2.8, oder im Falle einer proximalen Bifurkation des Nervus tibialis das Epineurium sowohl der medialen als auch der lateralen Plantaräste proximal des Schnitts in Schritt 2.8.
HINWEIS: Das Epineurium ist weißer und fester im Vergleich zu den Nervenfasern im Inneren, die gelber und weicher sind. - Platzieren Sie vorsichtig einen 8-0 Nylonnaht (siehe Materialtabelle) durch das Epineurium des proximalen Nervenendes, indem man das Epineurium vorsichtig mit einer Pinzette festhält und die Nadel mit einem Biss von etwa 0,5 mm zwischen Nerv und Epineurium steckt. Ziehen Sie die Naht durch und beißen Sie mit der Nadel subkutan in das Ende des in Schritt 2.7 hergestellten Unterhauttunnels. Machen Sie einen Knoten, der den Nerv seitlich in den Unterhauttunnel transponiert.
HINWEIS: Wenn beide Plantaräste ein gemeinsames Epineurium haben, sollte eine Naht ausreichen. Wenn beide Plantaräste ein eigenes Epineurium haben, sollte jedes Epineurium einzeln fixiert werden. Vermeiden Sie es, die Naht durch die Haut zu legen; Fixieren Sie es nur subkutan. - Platzieren Sie eine dickere Naht mit einer dunklen Farbe (vorzugsweise eine blaue oder schwarze 4-0-Naht) bündig mit dem fixierten Nervenende und dringen Sie nicht in die Haut ein. Stellen Sie sicher, dass die Naht von außen sichtbar ist. Prüfen Sie, ob der Nerv nach dem Bewegen der Pfote und der Muskeln an Ort und Stelle bleibt. Schneiden Sie die Nahtenden beim 4-0 mit einem etwas längeren Nahtende ab als beim 8-0 Naht.
- Ändern Sie die Vergrößerung des Mikroskops wieder auf 6x. Verschließen Sie die Haut mit intraepidermalen Nähten mit dem 8-0 Nähen und reinigen Sie die Haut sanft mit 0,9 % NaCl mit einem Wattestäbchen.
3. Postoperative Behandlung
- Setzen Sie die Ratte in einen sauberen Käfig unter einem Papiertuch in eine bequeme Position. Wenn der Raum kalt ist, legen Sie ein Wärmekissen unter einen Teil des Käfigs (nur unter einen Teil des Käfigs, da das Tier in der Lage sein sollte, der Hitze bei Bedarf zu entkommen). Sorgen Sie für einen einfachen Zugang zu Futter und Wasser.
- Lassen Sie die postoperative Ratte nicht unbeaufsichtigt, bis sie wieder ausreichend Bewusstsein erlangt hat, um die sternale Liege aufrechtzuerhalten. Die Ratte kann in die Gesellschaft anderer Tiere zurückgebracht werden, wenn sie sich nach der Operation vollständig von der Narkose erholt hat. Dies ist in der Regel nach 1 h der Fall, wenn die Ratte ihr normales Laufmuster und Verhalten zeigt.
- 24 h und 48 h nach der Operation ist eine Dosis von 0,5 mg/kg Carprofen subkutan (Bauchregion) zur Behandlung von postoperativen Schmerzen zu verabreichen.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Carprofen | Local Veterinary Pharmacy | n/a | Die örtliche Tierapotheke stellt Caprofen-Verdünnung her |
| Wattestäbchen | Nobamed | 974255 | |
| Elektrokauter | Fine Science Tools | 18010-00< | |
| Ethanol 70% | Interchema BV | 400406 | |
| Ethilon 4.0 | Johnson & Johnson | 1854G< | |
| Ethilon 8.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 | |
| Isoflo, isofluran Zoetis | Dechra Veterinärprodukte | B506 | |
| Mesh bottom cages | StoeltingCo | 57816 und 57824< | |
| Micro pinzetten | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Micro needle holder | Fine Science Tools | 12076-12 | |
| Micro scissors | Fine Science Tools | 15019-10 | |
| Micro tweezers | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| NaCl 0.9% | Trademed | H7 1000-FRE | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12004-16 | |
| Ophthalmic salbe | Lokaler Tierarzt pharmacy | n/a | Die örtliche Tierapotheke stellt die Augensalbe |
| Scalpel | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Stereo-Operationsmikroskop | Leica | A60 F | |
| Steriles Blatt mit Loch | Evercare OneMed | 1555-01 | |
| Chirurgische Klinge nr.15 | Fine Science Tools | 10015-00< | |
| Tweezers | Fine Science Tools | 11617-12 |
