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Analyse der Calciumdynamik und der Membranpotentialänderungen in einem arteriolären Endothel der Maus

April 28th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Hakim, M. A. et al., Isolierung und funktionelle Analyse des arteriolären Endothels des Maus-Hirn-Parenchyms. J. Vis. Exp. (2022).

Dieses Video zeigt die funktionelle Analyse einer arteriolären Endothelröhre, die aus einem Mausgehirn isoliert wurde. Es werden die Schritte zur Messung des intrazellulären Kalziumspiegels und des Membranpotentials sowohl zu Studienbeginn als auch als Reaktion auf pharmakologische Stimulation beschrieben.

Protocol

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p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Tierschutzbehörde überprüft und genehmigt. Überprüfungsausschuss.

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Results

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Abbildung 1: Anwendung einer Endothelröhre zur physiologischen Untersuchung von Signalwegen, die mit der Regulation des Blutflusses zusammenhängen. (A) Eine scharfe Elektrode (violetter Pfeil) befindet sich in einer Zelle einer Endothelröhre, die im Datenerfassungsfenster für die Photometrie fokussiert ist. (B) Repräsentative Aufzeichnung von intrazellulärem Ca2+<.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AmplifiersMolecular Devices, Sunnyvale, CA, USAAxoclamp 2B & Axoclamp 900A
Akustische BasismonitoreAmpol US LLC, Sarasota, FL, USA BM-A-TM
Badkühler (Isotemp 500LCU)ThermoFisher Scientific13874647
Kapillaren aus Borosilikatglas (Pinning)Warner InstrumentsG150T-6
Kapillaren aus Borosilikatglas (scharfe Elektroden)Warner InstrumentsGC100F-10
BSA: RinderserumalbuminSigmaA7906
CaCl2: CalciumchloridSigma223506
DMSO: DimethylsulfoxidSigmaD8418
DurchflussregelventilWarner Instruments FR-50
Fluoreszenzsystemschnittstelle, ARC-Lampe und Stromversorgung, Hyperschalter und PMTMolecular Devices, Sunnyvale, CA, USAIonOptix Systems
FunktionsgeneratorEZ Digital, Seoul, SüdkoreaFG-8002
Fura-2 AM FarbstoffInvitrogen, Carlsbad, CA, USAF14185
GlukoseSigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)G7021
HCl: SalzsäureThermoFisher Scientific (Pittsburgh, PA, USA)A466250
HeadstagesMolecular DevicesHS-2A & HS-9A
HEPES: (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethensulfonsäure)SigmaH4034 
Inline SolutionHeater Warner InstrumentsSH-27B
KCl: KaliumchloridSigmaP9541
MgCl2: MagnesiumchloridSigmaM2670
MicroforgeNarishige, East Meadow, NY, USA MF-900
MikromanipulatorSiskiyou MX10
Mikropipettenabzieher (digital)Sutter Instruments, Novato, CA, USAP-97 oder P-1000
Mikroskop (Nikon-invers)Nikon Instruments Inc, Melville, NY, USATs2
Mikroskop ( Nikon-invertiert)Nikon Instruments IncEclipse TS100
MikroskopobjektiveNikon Instruments Inc20X (S-Fluor) und 40X (Plan Fluor)
Mikroskopplattform (eloxiertes Aluminium; Durchmesser, 7.8 cm)Warner InstrumentsPM6 oder PH6
Mikroskoptisch (Aluminium)Siskiyou, Grants Pass, OR, USA8090P
MTA: 2-Methylthioadenosindiphosphat-TrinatriumsalzTocris1624
NaCl: NatriumchloridSigmaS7653
NaOH: NatriumhydroxidSigmaS8045
OszilloskopTektronix, Beaverton, Oregon, USA TDS 2024B
Phasenkontrast-ObjektiveNikon Instruments Inc (Ph1 DL; 10X & 20X)
Plexiglas-SuperfusionskammerWarner Instruments, Camden, CT, USARC-27
StereomikroskopeZeiss, NY, USAStemi 2000 & 2000-C
Spritzenvorsatzfilter (0.22 μm)ThermoFisher Scientific722-2520
Temperaturregler (Dual Channel)Warner InstrumentsTC-344B oder C
VentilsteuerungssystemWarner InstrumentsVC-6
Technische Fertigung des Schwingungsisolationstisches, Peabody, MA, USA Micro-g

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Calcium DynamicsMembrane PotentialArteriolar EndotheliumMouse BrainFluorescent DyeElectrode InsertionGPCR StimulationIntracellular CalciumPotassium EffluxFunctional Analysis

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