Durchführung einer Crush-Axotomie am Gesichtsnerv in einem Mausmodell

Zusammenfassung

Quelle: Olmstead, D. N., et al., Axotomie des Gesichtsnervs bei Mäusen: Ein Modell zur Untersuchung der Reaktion von Motoneuronen auf Verletzungen. J. Vis. Exp. (2015).

Dieses Video zeigt das Verfahren der Gesichtsnervenquetschung an einer Maus, bei dem durch stumpfe Dissektion durch wichtige Orientierungspunkte der Stamm des Nervus facialis am Foramen stylomastoideus freigelegt wird. Eine Pinzette wird dann verwendet, um den Nervenstamm zu komprimieren, was zu axonalen Schäden führt und die neuronale Signalübertragung stört.

Protokoll

Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.

1. Chirurgischer Ansatz

1. Richten Sie das Stereoskop auf das Operationsfeld aus und fokussieren Sie es. Stellen Sie den Nasenkonus ein und kleben Sie ihn so fest, dass er am Rand des Gesichtsfeldes positioniert ist.
2. Wenn die Maus auf der linken Seite liegt, kleben Sie die Kante des rechten Ohrs mit Klebeband an den Nasenkonus und legen Sie den Bereich hinter dem Ohr frei, in dem der Schnitt gemacht wird. Stellen Sie sicher, dass die Vena auricularis posterior horizontal über das Ohr verläuft. Beachten Sie, dass die richtige Platzierung des Tieres und das Tapen des Ohres entscheidend sind, um den Gesichtsnerv schnell zu finden.
3. Befeuchten Sie das Fell am und hinter dem Ohr mit 70% Ethanol und rasieren Sie die Operationsstelle mit einem Rasiermesser oder Skalpell. Das Vornässen des Fells erleichtert die Rasur an dieser anatomischen Stelle.
4. Reinigen Sie die Haut mit einer Jodlösung, wie z. B. einem chirurgischen Betadin-Peeling (7,5 % Povidon-Jod), gefolgt von 70 % Ethanol. Wiederholen Sie diese Reinigung noch zwei weitere Male, um den Bereich gründlich zu desinfizieren.
5. Um zu bestimmen, wo der Schnitt gemacht werden soll, verfolgen Sie die Vena auricularis posterior vom Ohr kaudal bis zum Bereich hinter dem Ohrvorsprung. Machen Sie mit einer Federschere einen Schnitt von 4 mm 2 - 3 mm hinter der Protuberanz.
6. Präparieren Sie das subkutane Fett und die Faszie mit einer stumpfen Dissektion. Vermeiden Sie das direkte Schneiden mit der Schere, da Blutgefäße oder Muskelgewebe leicht beschädigt werden können.
7. Wenn Blutungen auftreten, üben Sie mit einem sterilen Wattestäbchen mindestens 30 Sekunden lang Druck auf die Operationsstelle aus. Wenn ein erheblicher Flüssigkeitsverlust auftritt, injizieren Sie der Maus intraperitoneal bis zu 0,5 ml sterile 0,9%ige Kochsalzlösung mit einer 25- oder 27-G-Nadel.
8. Verwenden Sie mehrere wichtige Orientierungspunkte, den Nervus accessorius spinalis, den Gehörgang und den Musculus digastricus anterior (siehe unten), um den Gesichtsnerv zu lokalisieren. Präparieren Sie um diese Orientierungspunkte herum, bis die Äste des Gesichtsnervs sichtbar sind. Der Nerv erscheint bei seiner Enthüllung als signifikante feste weiße Struktur, und eine Faszienschicht haftet an den darunter liegenden Strukturen.
   1. Finde den Nervus accessorius spinalis, der vom kaudalen Teil des Schädels ausgeht, um den Trapezmuskel zu innervieren, sobald das subkutane Fett und die Faszie präpariert wurden. Der Nervus facialis befindet sich tief zum Nervus accessorius spinalis.
   2. Finden Sie den knorpeligen Gehörgang, der perlweiß aussieht und rostral zum Gesichtsnerv zu sehen ist.
   3. Finde den Muskelbauch des vorderen Digastricus-Muskels, der auf dem Gesichtsnerv und kaudal zum Gesichtsnerv liegt.
9. Wenn die Hauptäste des Nervus facialis sichtbar sind, verfolgen Sie sie dorsal, um ihren Ursprung aus dem Foramen stylomastoideus zu finden. Halten Sie die Operationsstelle mit einer feinen Dumont-Pinzette #5/45 offen, schieben Sie die Federscherenspitzen dem Weg des Nervs nach vorne und bewegen Sie dann die Pinzette nach dorsal, um den neu vorgeschobenen Bereich offen zu halten.
10. Stellen Sie sich an dieser Stelle den Rumpf des Nervus facialis mit den Jochbein-, Bukkal- und marginalen Unterkieferästen vor.
    HINWEIS: Der temporale Ast befindet sich näher am Foramen. Der Nervus mandibularis marginalis verzweigt sich in seinen oberen und unteren Teil näher am Kiefer, so dass diese Nervenäste auf dieser Höhe nicht sichtbar sind.
    1. Wenn Sie eine Quetschverletzung durchführen, verwenden Sie eine Dumont #5/45 Pinzette, um den Nerv 30 Sekunden lang mit konstantem Druck zu komprimieren, um alle Axone zu durchtrennen, und wiederholen Sie dann diesen Quetschvorgang in einem zweiten Winkel senkrecht zur ersten Quetschstelle. Vermeiden Sie es, während des 30-Sekunden-Drucks variablen Druck auszuüben, da sonst die Verletzungen zwischen den Tieren ungleichmäßig sind.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Stereo Microscope	Leica	M60
Beschriftungsband	Fisher Scientific	15-952<
Vannas-Tübingen Federschere - Gerade/Scharf/8.5cm/5mm Schnittkante	Fine Science Tools	15003-08	Vor Gebrauch sterilisieren
Dumont #5/45 Pinzette - Standard tips/Abgewinkelt 45°/Dumoxel/11cm	Fine Science Tools	11251-35	Vor Gebrauch
0.9% Natriumchlorid-Injektion, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, mit Spender	Fisher Scientific	19-027132
70% Ethanol
Glass Bead Sterilizer

td style='width:151pt;'> sterilisieren