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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Platzierung von Aneurysmaclips
- Platzieren Sie einen 30-G-Aneurysmaclip der Ratte auf jeder Gebärmutterarterie. Stellen Sie sicher, dass der Blutfluss, einschließlich der proximalen und distalen Impulse, unterbrochen und die Gebärmuttergefäße, einschließlich der einzelnen Plazenten, verdunkelt werden. Decken Sie die freiliegenden Hörner und das gesamte Operationsfeld mit Gaze ab und spülen Sie sie mit steriler Kochsalzlösung. Bewässern Sie das Feld etwa alle 10 Minuten, um es feucht zu halten.
- Entfernen Sie nach 60 Minuten die Gaze und bewässern Sie das Feld. Stellen Sie sicher, dass die Gebärmutterhörner und -gefäße für eine erfolgreiche Clipentfernung ausreichend befeuchtet sind. Entfernen Sie jeden Aneurysmaclip vorsichtig mit einer Pinzette. Achten Sie darauf, dass das Gefäß nicht traumatisiert wird, und bewahren Sie die Integrität des Gewebes während der Entnahme.
- Spülen Sie die Gebärmutterhörner und das Feld gründlich und achten Sie darauf, verirrte Mullfäden von den Fruchtblasen zu entfernen.
2. Injektion von Lipopolysaccharid in das Fruchtwasser
- An der Basis jeder einzelnen Fruchtblase, direkt vor der Plazentaplatte, injizieren Sie 100 μl Lipopolysaccharid (LPS) (4 μg/Sack) mit verdünntem Evan-Blau-Farbstoff in das Fruchtwasser. Verwenden Sie eine stumpfe Pinzette, um jede Fruchtblase zu stabilisieren und in eine optimale Position für die Injektion zu drehen. Verdünnt Evans blauer Farbstoff ist ein Kontrastmittel, das hilfreich ist, um die richtige Platzierung und Injektion der Spritze zu bestätigen.
HINWEIS: Verwenden Sie für die intraamniotischen Injektionen nur eine ultrafeine 0,3-ml-Insulinspritze mit einer aufgesetzten 8 mm 31 G-Nadel. Die Verwendung von Nadeln mit größerer Stärke führt zu chronischem Fruchtwasserverlust, fetalem Tod und Resorption der Schwangerschaft. Kleine Mengen an Fruchtwasseraustritt bei der Entnahme der Spritze können durch direkten Druck auf die Fruchtblase gemildert werden. Einige Rattenföten können ein gewisses Maß an Oligohydramnion tolerieren. Akuter Fruchtwasserverlust durch eine Punktion mit großen Nadeln oder eine versehentliche Punktion, die zu einem chronischen Flüssigkeitsaustritt führt, führt jedoch zum Verlust des Fötus und in schweren Fällen zum Verlust benachbarter Schwangerschaften. - Spülen Sie die Gebärmutterhörner 3x mit steriler Kochsalzlösung.
3. Schließen der Laparotomie
- Mit einer Pinzette die Gebärmutterhörner vorsichtig wieder in die Bauchhöhle zurückführen. Um einen ausreichenden Abstand zwischen den Fruchtblasen und dem Mittellinienschnitt zu gewährleisten, nähern Sie sich den Rändern der muskulofaszialen Schicht mit einer verlaufenden 3-0-Seidennaht wieder an. Achten Sie auf die Platzierung der Fruchtblasen, während Sie den Muskelschnitt schließen. Achte darauf, dass du nicht in oder durch einen Sack nähst.
- Nähern Sie sich der Hautschicht mit einer verlaufenden 3-0-Seidennaht wieder an und schließen Sie die Hautschicht.
HINWEIS: Die Laparotomie sollte in zwei Schichten durchgehender Nähte geschlossen werden, um eine Haut- und Muskelausdehnung mit zunehmender Schwangerschaft zu ermöglichen. Durchgehende Nähte ermöglichen eine gleichmäßig verteilte Wundspannung. Unterbrochene Nähte sind weniger erwünscht, da mehrere Knoten irritierend sind und von der Ratte nach der Narkose leicht zerkaut werden können. Chirurgische Klammern sind nicht erwünscht. Die Schwänze der chirurgischen Knoten sollten sehr kurz (<3 mm) geschnitten werden. - Injizieren Sie 1 ml 0,125 % Bupivacain subkutan um die Wundränder herum mit einer 26 G Nadel. Eine Dosis von 0,1 mg/kg Buprenorphin subkutan in den Nacken verabreichen.
- Schalten Sie Isofluran aus und trocknen Sie die Ratte bei Bedarf mit einem Handtuch ab. Setzen Sie die Ratte in einen sauberen Heimkäfig und überwachen Sie, wie sie sich von der Narkose erholt. Stellen Sie sicher, dass die Ratte nicht unterkühlt.