Induktion einer Rückenmarksprellung in einem Mausmodell unter Verwendung einer koaxialen Plattform für Rückenmarksverletzungen

Zusammenfassung

Quelle: Elzat, E. Y. Y., et al., Etablierung eines Modells für Rückenmarksverletzungen bei Mäusen auf der Grundlage einer minimal-invasiven Technik. J. Vis. Exp. (2022).

Dieses Video zeigt die Methode zur Induktion einer Prellungsverletzung im Rückenmark T9 in einem Mausmodell unter Verwendung einer koaxialen Plattform für Rückenmarksverletzungen. Auf das Rückenmark auf T9-Niveau wird ein Gewicht fallen gelassen, das eine Prellung verursacht, die sofort eine Verfärbung und Schwellung des Gewebes verursacht.

Protokoll

Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.

1. Lokalisierung und Laminektomie des 9^th Brustwirbels (T9)

HINWEIS: Weibliche C57BL/6J-Mäuse im Alter von 9-10 Wochen wurden von der Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, China) gekauft.

1. Autoklavieren Sie eine Reihe von chirurgischen Instrumenten für das Experiment und sterilisieren Sie den Operationstisch vor der Operation mit 75% Alkohol.
2. Injizieren Sie Buprenorphin zur Analgesie (0,05-2,0 mg/kg, subkutan) 30 Minuten vor der Anästhesie bei Verletzungsoperationen. Dann betäuben Sie die Maus mit Isofluran (Induktion: ~3-5%, Erhaltung: ~1,5-2%). Prüfen Sie, ob das Tier durch die Reflexe des Schwanzes oder der Zehenklemme vollständig betäubt ist. Sobald die Anästhesie wirksam ist, legen Sie die Maus in Bauchlage an einem dafür vorgesehenen Teil des Operationstisches und bestreichen Sie die Hornhaut mit Augensalbe (tragen Sie Augensalbe auf die Hornhaut auf, um die Augen während der Operation vor dem Austrocknen zu schützen).
   1. Rasieren Sie das Haar von der Schwanzblume bis zum Rostral mit einem Elektrorasierer über die thorakolumbale Wirbelsäule. Sterilisieren Sie die Haut mehrmals in kreisenden Bewegungen mit Jodophor für 30 s, gefolgt von 75% Alkohol. Tragen Sie ein steriles OP-Tuch auf und machen Sie mit einem Skalpell und einer Klinge einen ca. 1,5 cm langen Schnitt von etwa dem 6^th Brustwirbel (T6) bis zum 13^th Brustwirbel (T13).
      HINWEIS: Palpieren Sie entlang des Rippenrandes bis zur Mittellinie, wo sich der 12^th Brustwirbel (T12) - T13 interspinöser Raum befindet. Machen Sie einen 1,5 cm langen Schnitt in den Rostral, und der Schnitt ist ungefähr bündig mit den Wirbeln T6-T13.
3. Erkunden Sie die 13^th Rippe auf einer Seite des knöchernen Teils unter dem Operationsmikroskop. Untersuchen Sie den Dornfortsatz in der Mittellinie, indem Sie leicht den Bereich des Costovertebralen Winkels und dann in Richtung des Rostrals berühren, um den interspinösen Raum von T12-T13 zu lokalisieren. Erforschen Sie den interspinösen Raum des Brustwirbels T9 - 10^th (T10) vom Raum des T12-T13 bis zur rostralen Seite. (Abbildung 1A, 2A)
4. Präparieren Sie den Musculus paraspinalis entlang des Dornfortsatzes des T9 zu den vorderen und hinteren Facettengelenken beider Seiten mit einer Mikroschere (Abbildung 2B). Ziehen Sie die paraspinalen Muskeln mit Mikroretraktoren zurück und reinigen Sie das Weichgewebe an der Lamina und im interspinösen Raum des Brustwirbels 8^th (T8) - T9 und T9-T10 mit einer Mikroschere.
5. Führen Sie die T9-Laminektomie durch, klemmen Sie den Dornfortsatz von T9 mit einer mikrochirurgischen Pinzette ein, heben Sie ihn leicht an, führen Sie die Mikroschere parallel entlang der rechten dorsolateralen Seite der Lamina ein, um eine Schädigung des Rückenmarks zu vermeiden, und schneiden Sie die Lamina mit einer Mikroschere ab. Wiederholen Sie dies auf der linken Seite, und das Rückenmark kann freigelegt werden (Abbildung 1B, 2C).
6. Lösen Sie vor dem Fixieren des Wirbels den Universalarm und klemmen Sie die 9^th bis 10^th Facettengelenke auf beiden Seiten des Wirbels mit der Mikromückenzange des Wirbelstabilisators langsam ein. Ziehen Sie die Schrauben an der Mikromückenzange fest, und der Wirbel ist somit stabilisiert. Passen Sie das Rückenmark an die horizontale Ebene an, ziehen Sie den Universalarm fest und fixieren Sie den Wirbel (Abbildung 2D).

2. T9-Prellung

1. Sobald das Rückenmark auf T9-Ebene freigelegt und der Wirbel fixiert ist, zielen Sie mit der Spitze in der Hülse unter dem Operationsmikroskop auf das Rückenmark (Abbildung 2E).
2. Prüfen Sie, ob die Oberfläche der Spitze von der hinteren und lateralen Seite des Rückenmarks aus parallel zum Rückenmark verläuft, da die Beziehung zwischen dem Rückenmark und der Spitze unter dem Mikroskop leicht zu beobachten ist und der Operationstisch leicht gedreht werden kann.
3. Prüfen Sie, ob die Oberfläche der Spitze parallel zu den beidseitigen Rändern der verschonten Lamina ist, bevor die Spitze nach der Laminektomie mit dem Rückenmark in Kontakt kommt, da es sich um eine natürliche Referenzebene parallel zum Rückenmark handelt.
4. Nachdem Sie den interspinösen Raum des T12-T13 lokalisiert haben, senken Sie die Hülse ab, bis das Ende des Schlagkörpers mit der Markierung auf dem Beobachtungsfenster übereinstimmt und die angegebene Höhe von 22 mm erreicht ist. Ziehen Sie den Abziehstift heraus, um das Gewicht zu lösen (1,3 g, 2,0 g oder 2,7 g je nach Gruppe, wobei jede Gruppe 3 Mäuse umfasst und jede Gruppe eine Maus für jeden Zeitpunkt hat).
   HINWEIS: Das Rückenmark sollte parallel zum Boden und senkrecht zur Spitze sein; Bewegen Sie den Operationstisch, um das mikroskopische Gesichtsfeld zu gewährleisten, da der Tisch sehr kompakt ist.
5. Entfernen Sie den Schlagkörper, wenn die Prellung abgeschlossen ist, und beobachten Sie den Grad der Rückenmarksverletzung (SCI) unter dem Operationsmikroskop. In der milden Gruppe ist eine hellrote Farbveränderung zu sehen, während in der moderaten Gruppe die Verletzungsstelle innerhalb von 3-4 s dunkelrot auftritt und möglicherweise eine Eminenz beobachtet werden kann. In der schweren Gruppe können die dunkelroten Manifestationen sofort auftreten, und eine deutliche Eminenz in der Dura manifestiert sich, aber die Dura ist immer noch in einer konsistenten Form (Abbildung 2F).

Ergebnisse

Abbildung 1. Ein bildgebendes Diagramm der T13-Methode zur Lokalisierung von Wirbeln. (A) Die 13^th Rippe und T13 sind relativ konstante anatomische Strukturen. Der costovertebrale Winkel von T13 kann unter dem Mikroskop leicht erkannt werden, von wo aus der Bediener in Richtung des Dornfortsatzes tasten und den inter...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ethanol	Fuyu Reagent	64-17-5
Fluoreszenzmikroskop	KEYENCE	BZ-X800<
Mice	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompany	C57BL/6J
Microsurgery apparatus	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Alle chirurgischen Instrumente sind Sonderanfertigungen	Ophthalmic scirons, micro mosquito pinps, microsurgery pinps, micro scissors
RWD Laboratory Inhalation Anesthetic Station	RWD Life Science Co., Ltd	R550
Kleintier-In-vivo-MikroCT-Bildgebungssystem	PerkinElmer	Quantum GX2
Rückenmarksverletzung koaxiale Plattform	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Maßgeschneidert (Feng's Standard)<

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