Generieren eines Mausmodells mit einer Rückenmarksverletzung

Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.

1. Präparation von chirurgischen und nicht-chirurgischen Instrumenten

1. Sterilisieren Sie die chirurgischen und nicht-chirurgischen Instrumente im Autoklaven.
2. Reinigen Sie den OP-Tisch mit 70 % Ethanol und erwärmen Sie ein Heizkissen auf 37 °C.
3. Legen Sie das Heizkissen auf den Operationstisch und decken Sie es mit sterilen OP-Tüchern ab.
   HINWEIS: Bei allen Überlebensverfahren wird die "No Touch"-Technik verwendet, um die Sterilität zu erhalten.

2. Vorbereitung der Tiere und Durchführung der T9-T10 spinalen Laminektomie

1. Beschaffung von erwachsenen (Balb/c) 10 Wochen alten männlichen Mäusen. Induzieren Sie bei jedem Tier mit einem Inhalator eine Anästhesie, beginnend mit 5 % Isofluran und dann auf 2-3 % reduzierend, um die Sedierung für den Rest der Eingriffe aufrechtzuerhalten.
2. Bestätigen Sie die vollständige Anästhesie, indem Sie keine Reaktion auf eine durch Schwanz-/Pfotenkneifen induzierte Nozizeptionsstimulation hervorrufen.
3. Rasieren Sie das Haar über den Rücken (von Kopf bis Schwanz) mit einer elektrischen Haarschneidemaschine und tragen Sie dann die Enthaarungscreme (3 min) auf, um die restlichen Haare zu entfernen. Waschen Sie zum Schluss den Rücken mit fließendem Wasser/nassem Peeling und bringen Sie die Tiere in ihre Käfige zurück.
   HINWEIS: Dies ist notwendig, um zusätzliche Hautreizungen und chemische Verunreinigungen zum Zeitpunkt der Hautverletzung zu vermeiden
4. Tragen Sie am nächsten Tag eine Augensalbe auf die Hornhaut auf, um die Augen während des chirurgischen Eingriffs vor dem Austrocknen zu schützen. Schrubben Sie dann die Haut mit 3 alternativen Präparaten Betadin-Peeling und 70% Ethanol.
5. Führen Sie mit einem Skalpell einen Hautschnitt (~1,0-1,5 cm) entlang der Mittellinie auf dem Rücken auf Höhe der Wirbel T8-T12 durch.
   HINWEIS: Die Höhe der Wirbel wird durch Rückwärtszählen des Wirbels von T13 anhand der Position der schwebenden Rippen bestimmt, die dem T13-Wirbel entsprechen.
6. Befreien Sie das subkutane Fettgewebe, um Zugang zu den paraspinalen Muskeln zu erhalten, und präparieren Sie sie dann langsam, um die Dornfortsätze und Laminen auf beiden Seiten freizulegen.
   HINWEIS: Führen Sie diesen Vorgang sehr sorgfältig durch, um übermäßige Blutungen oder Verletzungen des Rückenmarks an dieser Stelle zu vermeiden.
7. Führen Sie eine Laminektomie durch, um das Rückenmark (T9-T10 Wirbel) freizulegen, indem Sie die Wirbelsäule vorsichtig mit einer Mikrodisparierzange abziehen.
   HINWEIS: Führen Sie die Laminektomie so durch, dass ein Überschuss des Rückenmarks freigelegt wird, um die Entstehung der Verletzung zu erleichtern. In der Kontrollgruppe wird nur die Laminektomie durchgeführt.

3. Durchführung der T9-T10 Complete Spinal Cord Injury (SCI)

1. Sichern Sie mit einer Pinzette die Wirbelsäule an T8 und heben Sie sie an, um die Wirbelsäulenverkrümmung zu übertreiben.
2. Mit einer feinen Schere wird das Rückenmark zwischen dem Wirbel T9 und T10 bis zum Boden des Wirbelkanals durchtrennt, um eine vollständige Durchtrennung zu gewährleisten.
3. Nachdem Sie die vollständige Durchtrennung unter einem Operationsmikroskop beobachtet haben, tragen Sie ein Stück subkutanes Fett auf die Laminektomiestelle auf, um das Rückenmark vor dem Verschluss der Operationsstelle zusätzlich zu schützen.
4. Zum Schluss verschließen Sie die Wunde und vernähen die paravertebralen Muskeln und die oberflächlichen Faszien mit durchgehenden Nähten und verschließen dann die Haut mit Nahtklammern.
5. Beobachten Sie nach einer Rückenmarksverletzung den Stuhlgang am nächsten Tag. Behandeln Sie die Harnblase jedoch durch manuelle Blasenentleerung.
   HINWEIS: Die Basso-Maus-Skala (BMS) kann verwendet werden, um den Fortschritt der funktionellen Erholung der Hintergliedmaßen nach einer Rückenmarksverletzung am Tag 2 und dann wöchentlich zu überwachen.