Eine hydrophobe Gewebereinigungsmethode für eine Gewebeprobe aus dem Gehirn einer Ratte

Zusammenfassung

Quelle: Kirchner, K.N., et al., Eine hydrophobe Gewebereinigungsmethode für Hirngewebe von Ratten. J. Vis. Exp. (2020).

Dieses Video zeigt die Methode der hydrophoben Gewebereinigung einer Gewebeprobe des Rattenhirns. Die Probe wird sequentiell in Methanol dehydriert, mit einem Dichlormethan-Methanol-Gemisch behandelt, um Lipide und Pigmente aufzulösen, und zur vollständigen Gewebereinigung auf Dibenzylether übertragen, was eine detaillierte Bildgebung ohne Dünnschnitte ermöglicht.

Protokoll

Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Kommission für ethische Überprüfung der Tiere überprüft und genehmigt.

1. Gewebereinigung

1. Inkubieren Sie die Probe in einer 20%igen Methanol/80%igen deionisierten Wasserlösung für 1 h bei Raumtemperatur (RT).
2. Inkubieren Sie die Probe in einer Lösung von 40 % Methanol / 60 % deionisiertem Wasser für 1 h bei RT.
3. Inkubieren Sie die Probe in einer Lösung von 60 % Methanol / 40 % deionisiertem Wasser für 1 h bei RT.
4. Inkubieren Sie die Probe in einer Lösung von 80 % Methanol / 20 % deionisiertem Wasser für 1 h bei RT.
5. Inkubieren Sie die Probe 1 h lang in 100% Methanol bei RT.
6. Inkubieren Sie in frischem 100%igem Methanol über Nacht bei RT.
7. In 66 % Dichlormethan (DCM)/ 33 % Methanol 3 h unter Schütteln bei RT inkubieren.
8. Inkubieren Sie in Dibenzylether (DBE) ohne Schütteln. Lassen Sie die Probe in DBE, bis sie klar ist, und lagern Sie sie bis zur Bildgebung in DBE.

Materialien