Analyse von Amyloid-Strukturen in einem Gewebeschnitt mit Hilfe der Fluoreszenzlebensdauer-Bildgebungsmikroskopie

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Nyström, S., et al., Bildgebung von Amyloidgeweben, die mit lumineszierenden konjugierten Oligothiophenen gefärbt sind, durch hyperspektrale konfokale Mikroskopie und Fluoreszenzlebensdauer-Bildgebung. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video zeigt die Analyse von Amyloidstrukturen mit Hilfe der Fluoreszenzlebensdauer-Bildgebungsmikroskopie oder FLIM, wobei der hFTAA-Farbstoff verwendet wird, um kompakte Kerne als blau/grün und instabile Peripherien als rot/gelb in farbcodierten Bildern zu zeigen, was die Amyloidorganisation widerspiegelt.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Vorbereitung von Gewebeproben

HINWEIS: Viele Gewebetypen können mit Heptamer-Formylthiophenessigsäure (hFTAA) als Amyloidmarker abgebildet werden. hFTAA reagiert empfindlich auf die Aggregatkonformation. Die Färbung sollte daher vorzugsweise an ungestörten Aggregaten ohne Epitopfreilegung durchgeführt werden. Eine optimale spektrale Qualität wird erreicht, wenn die Gewebefixierung auf ein Minimum beschränkt wird. Daher wird frisches gefrorenes Material bevorzugt, das zum Zeitpunkt der Färbung vorsi....

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Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
hFTAA/Amytracker545	Ebba Biotech
Dako Eindeckmedium	Agilent technologies	GM304
LeicaDM6000	Leica
Lumen 200	Prior
Spectraview-System	ASI Spektralsystem Bildgebung
Spectraview-Software	ASI Spektralbildgebung		& #160;
LSM780	Zeiss
Zen 2010b v6.0 Software	Zeiss
FLIM-System	Becker & Hickl
Ar/ML 458/488/514	Zeiss
Abstimmbarer Laser im Tune	Zeiss

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