Visualisierung von Motoneuronenprojektionen und Axonverzweigungen mit Hilfe der Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie

Zusammenfassung

Source: Liau, E. S. et al. Visualisierung der motorischen Axonnavigation und Quantifizierung der Axon-Arborisierung in Mausembryonen mittels Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie. J. Vis. (2018).

Dieses Video zeigt die Verwendung von Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie zur Abbildung von Motoneuronenprojektionen und Axonverzweigungen in transgene Mausembryonen. Es beschreibt die Schritte bei der Probenvorbereitung, der Bildgebung und der 3D-Rekonstruktion axonaler Verzweigungen zur Beurteilung des Wachstums und der Konnektivität von Motoneuronen.

Protokoll

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p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Tierschutzbehörde überprüft und genehmigt. Überprüfungsausschuss.

Ergebnisse

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Hb9::GFP	Das Jackson-Labor	005029	Embryonen des embryonalen Tages 13.5 (E13.5)
4% Paraformaldehyd (PFA)			Für 200ml: Fügen Sie 20ml 10X PBS, 8g PFA in doppelt destilliertem Wasser hinzu. Stellen Sie den pH-Wert mit NaOH (10N) auf 7,4 ein. Filter, sterilisieren und bei -20 °C lagern.
Phosphatpuffer salzlösung 10X (PBS 10X)			Für 1L: 80 g NaCl, 2 g KCl, 14,4 g Dinatriumhydrogenphosphat, 2,4 g Kaliumdihydrogenphosphat hinzufügen und mit doppelt destilliertem Wasser auffüllen. Autoklavieren und lagern bei RT.
Triton X-100	Sigma	X100-500ML<
Fetal Bovine Serum<	26140079
Sheep polyclonal anti-GFP	AbD Serotec	4745-1051	1:1000<
Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep	Invitrogen	A-11015<
RapiClear 1.47 clearing reagenz	SunJin Lab	RC147001<
1.5ml micro tube	Sarstedt	72.690.001
24 wells plate	ThermoFisher	142475
5 SA Tweezer	ideal-tek	3480641
Iris Scissors striaght sharp/sharp	Aesculap<
Mikrochirurgie Skalpelle, zum Einmalgebrauch<	BA365<
Dissecting	Nikon	SMZ800<
Shaker<	RS-01
Lightsheet Z.1 microscope<
Imaris 8.4.0 Bildanalysesoftware	Bitplane, Zürich, Schweiz
B6.Cg-Tg(Hlxb9-GFP)1Tmj/J (Hb9::GFP mäuse)	Das Jackson Laboratory	005029

td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>ThermoFishertr style='height:20px;' >td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>1:1000<tr style='height:20px;' >td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #00000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>BC110Rtd style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Aesculaptd style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> microscopetd style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #00000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>TKStd style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Carl Zeiss Mikroskopie