Morphologisches und physiologisches Monitoring von Tumorsphäroiden mittels optischer Kohärenztomographie

Zusammenfassung

Quelle: Huang, Y. et. al., Längsschnittliches morphologisches und physiologisches Monitoring von dreidimensionalen Tumorsphäroiden mittels optischer Kohärenztomographie. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert die Verwendung optischer Kohärenz Tomographie (OCT) zur Überwachung von Tumorsphäroiden in einer Multi-Well-Platte durch Aufnahme hochauflösender Schnittbilder. Durch die Analyse von Lichtreflexionen von zellulären Strukturen erstellt OCT 3D-Modelle, um morphologische Merkmale wie Größe und Form zu bewerten und gleichzeitig lebensfähige von nicht lebensfähigen Zellen anhand von Veränderungen der Lichtstreuung im Laufe der Zeit zu unterscheiden.

Protokoll

1. Vorbereitung der Zellen

Ergebnisse

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Kundenspezifisches OCT-Bildgebungssystem für den Spektralbereich			Entwickelt in unserem Labor
Superlumineszenzdiode (SLD)	Thorlabs	SLD1325	Lichtquelle
2×2 Singlemode-Faserkoppler, 50:: 50 Teilungsverhältnis	AC Photonics	WP13500202B201
Referenzarm		{TAG_47}}
Linsentubus	Thorlabs
Thorlabs
Kollimierende Linse	Thorlabs	AC080-020-02 0-C
Fokussierobjektiv	Thorlabs
Thorlabs
Spiegel	Thorlabs	{{{ TAG_107}}
1D Translational Stage	Thorlabs
Thorlabs
Sockelpfosten	Thorlabs
Klemmgabel	Thorlabs
Probenarm
Linsentubus	Thorlabs
Adapter	Thorlabs
Kollimationslinse	Thorlabs	AC080-020-C
Galvanometer	Thorlabs{{TAG_195 }}
Relaisobjektiv	Thorlabs	AC254-100-C	Zwei Relaisobjektive zum Bau eines Teleskops setup
Dreieckige Spiegelhalterung	Thorlabs
Spiegel	Thorlabs
Ziel	Mitutoyo		{{ TAG_239}}
Sockelpfosten	Thorlabs
Spanngabel
Polarisationsregler	Thorlabs		{{ TAG_269}}
30mm Käfighalterung	Thorlabs
Käfigstange	Thorlabs
Stage			{{ TAG_299}}
3D-motorisierter Verschiebungstisch	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	JTH360XY
2D-Kipptisch
Rotationstisch	{{TAG_ 325}}
Tellerhalter			3D-gedruckt
Spektrometer
Linsentubus	Thorlabs{{TAG_ 355}}
Adapter	Thorlabs
Kollimierende Linse	Thorlabs	AC080-020-C
Gitter	Wasatch	G = 1145 lpmm
F-Theta-Objektiv	Thorlabs	FTH-1064-100
InGaAs-Zeilenkamera	Sensor Unlimited	SU1024-LDH2
Zellkulturkomponente{{TAG_ 414}}
HCT 116 Zelllinie	ATCC	CCL-247
Zellkulturflasche	SPL Life Sciences	70025
Pipette	Fisherbrand	14388100
Pipettenspitzen	Sorenson Bioscience	10340{TAG_459{ }}
Gibco GlutaMax DMEM	Thermo Fisher Scientific	10569044
Fötales Rinderserum, zertifiziert, US-Herkunft	Thermo Fisher Scientific	16000044
Antibiotikum-Antimykotikum (100X)	Thermo Fisher Scientific	15240062
Corning 96-Well-klarer runder Boden mit extrem niedrigem Aufsatz Mikrotiterplatte	Corning	7007
Gibco PBS, pH 7.4	Thermo Fisher Scientific	10010023
Gibco Trypsin-EDTA (0,5%)	Thermo Fisher Scientific	15400054
Forma Serie II 3110 CO2 Inkubator	Thermo Fisher Scientific	3120
Handschuhe	VWR	89428-750
Parafilm	Sigma-Aldrich{{ TAG_555}}	P7793
Transferpipetten	Globe Scientific	138080	{{TAG_569 }}
Zentrifuge	Eppendorf	5702 R	Zum Zentrifugieren des 15-ml-Röhrchens
Zentrifuge{{ TAG_583}}	NUAIRE	AWEL CF 48-R	Zum Zentrifugieren der 96-Well-Platte
Mikroskop	Olympus{{TAG_595}Olympus{{}}
Liste der gewerblichen ÜLGs
SD-OCT-System	Thorlabs	Telesto-Serie
} SD-OCT System	Wasatch Photonics	WP OCT 1300 nm
Software für Datenanalysen{{TAG_ 637}}
Basic Image Analysis	NIH	ImageJ	Fiji funktioniert auch.
3D-Rendering	Thermo Fisher Scientific	Amira	Kommerzielle Software. Option 1
3D-Rendering	Bitplane	Imaris	Kommerzielle Software. Möglichkeit 2. Wird im Protokoll verwendet
OCT-Erfassungssoftware			speziell in C++ entwickelt.
Bühnensteuerung	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	MRC_3	Integriert in den benutzerdefinierten OCT-Erfassungscode
OCT-Verarbeitungssoftware			Kundenspezifisch entwickelt in C++. GPU nutzen. Integriert in den benutzerdefinierten OCT-Erfassungscode.
Morphologische und physiologische Analyse			Kundenspezifisch entwickelt in MATLAB

{{ TAG_62}}Adapter{TAG_ 92}}Kinematische Spiegelhalterung{{ TAG_122}}Kontinuierlicher Graufilter{TAG_136{ }} {{ TAG_151}}{TAG_166{ }} {{TAG_ 181}}{{TAG_254{ }}Thorlabs{{}}{{TAG_340 }}{{}}{{TAG_ 386}} {TAG_400{ }}{{}}{{TAG_ 473}}{{}}{TAG_540{ }}{{}}{{ TAG_610}}