Messung der Proteinexpression im Nagetiergehirn mittels Nahinfrarot-Fluoreszenz und hochauflösender Abtastung

Zusammenfassung

Quelle: Kimmelmann-Shultz, B., <span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>et. al. Mit Nahinfrarot-Fluoreszenz und hochauflösendem Scannen zur Messung der Proteinexpression im Nagetiergehirn. J. Vis. (2019)

Dieses Video zeigt eine Nahinfrarot-Fluoreszenz- und hochauflösende Scanmethode zur Messung der Proteinexpression im Gehirn von Nagetieren.

Protokoll

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p style='line-height:1.2;margin-bottom:8pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen ethischen Überprüfungskommission für Tiere überprüft und genehmigt.

1. imaging

1. Platzieren Sie die Objektträger mit dem Gewebe nach unten auf der Nahinfrarot-Scanschnittstelle. Bilde entweder einen Objektträger oder mehrere Objektträger gleichzeitig mit einem Auswahlwerkzeug ab.

2. Bildfolien mit der höchsten Qualitätseinstellung mit einem Versatz von 0 nm und einer Auflösung von 21 μm. Der Scanvorgang dauert in der Regel 13-19 Stunden, abhängig von der verwendeten Scanausrüstung.

3. Bilder in die Bildanalysesoftware (z.B. Image Studio) importieren, um sie anzuzeigen und für semi-quantitatives Protein zu markieren Analyse.

2. Analyse der Proteinexpression<

p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-left:28.35pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>1. Öffnen Sie die Bildanalysesoftware und wählen Sie die Arbeitsbereich in die das Bild eingefügt wird. gescannt wurde.

2. Öffnen Sie das gescannte Bild in der Bildanalysesoftware, um den Scan anzuzeigen, und passen Sie auch an, welche Wellenlängen angezeigt werden als Kontrast, Helligkeit und Vergrößerung, die angezeigt werden, ohne das Rohbild oder die gesamte quantifizierte Emission zu verändern.

3. Identifizieren Sie die Schlüsselbereiche für die Quantifizierung und wählen Sie die Analysis Tabulator am oberen Rand der Seite, dann auswählen Draw Rectangle (oder Draw Ellipse<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>/ Draw Freehand), um ein Rechteck über den Bereich zu zeichnen, der quantifiziert werden soll.

4. Um die Größe des Rechtecks anzuzeigen, wählen Sie Shapes unten links auf dem Bildschirm, dann wählen Sie Columns unten rechts. Add Height<span style='font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'> undWidth Spalten, um die Formgröße zu identifizieren.

HINWEIS: Es ist wichtig, die Formgröße beim Vergleich der Quantifizierung zu kontrollieren. Es wird empfohlen, identische Formen zu verwenden, die an der gewünschten Quantifizierungsstelle platziert sind, um eine genaue Stichprobe der Emissionen für diese Region zu erhalten.

5. Benenne dann die Form und wiederhole den Vorgang. Sobald alle Regionen erfasst sind, können die verfügbaren Daten aus dem columns tab aggregiert und analysiert.

Materialien