Biolumineszenz-Bildgebung in einem EAE-Mausmodell

Zusammenfassung

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p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>Quelle: Schmitz, K., et al., Biolumineszenz und Nahinfrarot-Bildgebung von Optikusneuritis und Hirnentzündung im EAE-Modell der Multiplen Sklerose bei Mäusen. J. Vis. (2017).

Dieses Video zeigt die Methode zur Visualisierung und Überwachung von experimenteller Autoimmun-Enzephalomyelitis oder EAE-induzierter Entzündung im Sehnerv mit Biolumineszenz-Bildgebung. Dazu gehören die Positionierung der Maus, die Injektion von Reagenzien und die Aufnahme sequenzieller Bilder, um Veränderungen der Biolumineszenz im Laufe der Zeit zu überwachen.

Protokoll

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p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'>Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierarzt JoVE überprüft Prüfungsausschuss.

1. Biolumineszierende Bildgebung von Optikusneuritis und Gehirnentzündung

1. Einrichtung des Bildgebungssystems
   1. Führen Sie In-vivo-Bildgebung mit jedem Gerät durch, das die Analyse von Biolumineszenz- und Nahinfrarotsignalen ermöglicht.
   2. Halten Sie Mäuse während aller bildgebenden Verfahren unter einer Isofluran-Anästhesie von 2 - 2,5 %.
   3. Positionieren Sie eine oder zwei Mäuse nebeneinander in der Apparatur mit den mittleren Gaszuläufen. Positionieren Sie die obere Wirbelsäule in der Mitte.
   4. Um die Wirkung von Medikamenten zu bewerten, vergleichen Sie Mäusepaare mit zwei Mäusen gleichzeitig, eine pro Gruppe. Dies ist wichtig für die biolumineszierende Bildgebung.
   5. Schirmen Sie die Immunisierungsstelle mit einem schwarzen Tuch ab und machen Sie ein Foto und ein Basisbild, um die korrekte Positionierung der Maus/Mäuse zu beurteilen. Verwenden Sie für alle Bilder den B-Fokus in einem Abstand von 6,5 cm zur Kamera.
2. Injektion und Bildgebung der biolumineszierenden Entzündungssonde
   1. Verwenden Sie die in vivo Bildgebungssystemeinstellungen: Epi-BLI, Em-Filter offen, Ex-Filterblock, fstop 1, Binning 8, Fokus B = 6,5 cm, Belichtungszeit 120 s; nehmen Sie ein Basisbild auf.
   2. Injizieren Sie 100 μl i.p. des gebrauchsfertigen Chemilumineszenz-Reagenzes (40 mg/ml). Vor dem Befüllen der Spritze gut mischen.
   3. Nehmen Sie Biolumineszenzbilder 5, 10 und 15 Minuten nach der Injektion auf. Der zeitliche Verlauf des biolumineszierenden Peaks unterscheidet sich von Tier zu Tier.
      HINWEIS: Der Höhepunkt tritt 5 - 10 Minuten nach der Injektion auf; Ein Rückgang nach 15 min zeigt an, dass keine weiteren Bilder benötigt werden. Verwenden Sie Mauspaare aus Kontroll- und Behandlungsgruppen, um geringfügige Verzerrungen aufgrund unterschiedlicher Zeitverläufe zu eliminieren.
   4. Geben Sie Beschreibungen ein, die für das Experiment relevant sind. Beobachten Sie, wie ein Dialogfeld automatisch angezeigt wird. Es enthält Informationen wie Mausbelastung, Geschlecht, Zeitpunkt, Zeitpunkt der Sondeninjektion, Gruppe, etc. Speichern Sie alle Dateien in einem Ordner. Sie werden Zeit-Tags und alle Beschreibungen haben.

Materialien