Eine Technik zur Aspiration und Verarbeitung von perkutanen Nebenhodenspermien

Zusammenfassung

Dieses Video zeigt die perkutane Aspiration von Nebenhodenspermien bei einem Patienten mit Azoospermie, einer Erkrankung, die durch das Fehlen von Spermien im Sperma gekennzeichnet ist. Das Verfahren umfasst die Desinfektion des Hodensackbereichs, das Absaugen von Nebenhodenflüssigkeit mit einer Spritze mit einer speziellen Kulturlösung und die Aufbereitung der entnommenen Probe, um lebensfähige Spermien zu isolieren. Die vorbereiteten Spermien sind dann bereit für den Einsatz in fortgeschrittenen Verfahren zur Behandlung von Unfruchtbarkeit.

Protokoll

Alle Eingriffe, an denen menschliche Teilnehmer beteiligt sind, wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

1. Präoperative Vorbereitung

1. Vorbereitung von chirurgischem Zubehör
   1. Bereiten Sie das notwendige Material für den chirurgischen Eingriff vor, einschließlich einer Packung chirurgischer Instrumente, zwei 5-ml-Spritzen mit einer 0,7-mm-Nadel (0,7 x 32 Thin Wall Long Bevel (TWLB)), 60 ml Desinfektionslösung, zwei Paar sterile Gummihandschuhe und ein Stück steriler Klebeverband.
   2. Bitten Sie die Krankenschwestern, die Packung der chirurgischen Instrumente, die einer Hochdruckdampfsterilisation unterzogen wurden, auf Beschädigungen oder Ablauf zu untersuchen. Sobald Sie bestätigt haben, dass es keine Probleme gibt, legen Sie es auf den Instrumententisch und öffnen Sie die äußere Schicht.
   3. Für die Andrologen: Ziehen Sie sterile Gummihandschuhe an und öffnen Sie dann die innere Schicht der Verpackung der chirurgischen Instrumente, um zu überprüfen, ob das Sterilisationsindikatorband qualifiziert ist oder nicht, und stellen Sie sicher, dass alle Instrumente im Inneren vollständig sind.
   4. Bereiten Sie zwei 5-ml-Spritzen mit 0,7-mm-Nadeln (0,7 x 32 TWLB) für die Anästhesie und Operation vor und öffnen Sie dann die Ampulle mit der Lidocain-Injektion.
   5. Verwenden Sie eine sterile 5-ml-Spritze, um die Lidocain-Injektion abzusaugen, und entfernen Sie anschließend die Luftblasen aus der Spritze.
2. Vorbereitung des Patienten, der sich einer Operation unterzieht
   1. Organisation der Hautvorbereitung für den Patienten. Rasieren Sie die Schamhaare mit einem Einwegrasierer und waschen Sie den Damm und die umgebende Haut mit Seifenwasser, um sicherzustellen, dass keine überschüssigen Schamhaare oder Flecken vorhanden sind.
   2. Positionieren Sie den Patienten in einer Steinschnittposition auf dem Operationstisch, ziehen Sie die Hose aus und befestigen Sie das Oberteil über dem Bauchnabel, um den Damm und den Unterbauch unterhalb des Bauchnabels vollständig freizulegen.
   3. Stellen Sie den Winkel der schattenlosen Lampe ein, um den Hodensack des Patienten zu beleuchten.
   4. Verwenden Sie eine ovale Pinzette, um eine sterile Mullkugel zu greifen, die dann vollständig in Desinfektionslösung getaucht wird, um den Desinfektionsprozess einzuleiten. Führen Sie die Hautdesinfektion von der Peripherie bis zum Hodensack in folgender Reihenfolge durch: Unterbauch, Vorder- und Innenseite der Oberschenkel, Dammbereich, Penis und Hodensack.
   5. Tauschen Sie nach der Erstdesinfektion die sterile Mullkugel aus und wiederholen Sie den Desinfektionsvorgang. Nach drei Desinfektionsrunden ist der präoperative Desinfektionsprozess abgeschlossen.
   6. Beginnen Sie mit dem Verlegen steriler Handtücher, nachdem die Desinfektion abgeschlossen ist. Legen Sie zuerst ein steriles quadratisches Handtuch unter das Gesäß des Patienten, dann verteilen Sie ein steriles Lochtuch um den Operationsbereich und seine Umgebung, wobei der Hodensack im Lochbereich vollständig freigelegt wird.
3. Zubereitung der G-MOPS-PLUS-Kulturlösung
   1. Bitten Sie die Techniker des Embryonalkulturraums, ca. 2 ml G-MOPS-PLUS-Kulturlösung mit einer sterilen Pasteurpipette in die Kulturschale zu überführen. Schließen Sie den Deckel richtig und geben Sie ihn anschließend durch das Transferfenster an die Krankenschwester im Operationssaal.
   2. Stellen Sie die Kulturschale auf das sterile Handtuch auf dem Instrumententisch und öffnen Sie den Deckel.
   3. Aspirieren Sie mit einer weiteren 5-ml-Spritze etwa 0,2 mL G-MOPS-PLUS-Kulturlösung und entfernen Sie anschließend die Luftblasen für die zukünftige Verwendung.

2. Anästhesie und Chirurgie

1. Für die Andrologen: Halten Sie die mit der Lidocain-Injektion gefüllte Spritze in der rechten Hand, während Sie mit der linken Hand den Samenstrang des Patienten fixieren. Punktion subkutan und Injektion einer kleinen Menge Lidocain, um eine Quaddel zu bilden. Dann punktieren Sie subkutan und vertiefen sich in das Gewebe des Samenstrangs, wobei Sie mit der Injektion von etwa 0,5 ml Lidocain beginnen, nachdem bestätigt wurde, dass kein Blutrückfluss vorhanden ist. Um eine bessere Wirkung der Anästhesie des Samenstrangblocks zu erzielen, ändern Sie die Richtung der Injektionsnadel 2 bis 3 Mal an der gleichen Punktionsstelle und wiederholen Sie den Vorgang der Injektion von Lidocain in den Samenstrang.
2. Halten Sie den Hodensack des Patienten mit der linken Hand fest und sichern Sie den Nebenhoden, der punktiert werden muss. Bestätigen Sie durch Abtasten mit der rechten Hand die Stelle des Nebenhodens, an der die chirurgische Punktion erforderlich ist. Halten Sie dann die oben erwähnte Spritze mit Lidocain fest und injizieren Sie sie an der Einstichstelle unter die Haut, um eine lokale Infiltrationsanästhesie zu erreichen.
3. Halten Sie den Hodensack des Patienten mit der linken Hand fest und sichern Sie den Nebenhoden, der punktiert werden muss. Halten Sie dann die 5-ml-Spritze mit der G-MOPS-PLUS-Kulturlösung (0,2 mL) in die rechte Hand und stechen Sie senkrecht zur Haut in das Nebenhodengewebe. Halten Sie den Unterdruck in der Spritze aufrecht und punktieren Sie das Nebenhodengewebe wiederholt, so dass die Nebenhodenflüssigkeit unter Einwirkung von Unterdruck durch die Nadel eintritt.
4. Halten Sie weiterhin den Unterdruck aufrecht und ziehen Sie die Einstichnadel langsam zurück. Injizieren Sie die extrahierte Nebenhodenflüssigkeit in die Kulturschale. Nach Abschluss der Injektion aspirieren Sie die nahe gelegene G-MOPS-PLUS-Kulturlösung, um die Spritze zu spülen und so die Menge der gesammelten Nebenhodenflüssigkeit, die in die Kulturschale injiziert wird, zu maximieren.

3. Behandlung von chirurgischen Proben

1. Suche und Beobachtung von Nebenhodenspermien
   1. Übertragen Sie die Kulturschale mit der G-MOPS-PLUS-Kulturflüssigkeit und der Nebenhodenflüssigkeit durch das Transferfenster an den Embryolabortechniker.
   2. Die Techniker des embryonalen Kulturraums übernehmen die Kulturschale und stellen sie auf den Tisch eines inversen Lichtmikroskops und sichern sie. Schalten Sie den Netzschalter des Mikroskops ein und drehen Sie den Lichteinstellknopf auf eine geeignete Lichtintensität.
   3. Drehen Sie den Konverter des inversen optischen Mikroskops, wählen Sie die 10-fach Objektivlinse, drehen Sie die Grob- und Feinfokusspiralen nacheinander, um die Brennweite einzustellen. Beobachten Sie die Fokussierungssituation und suchen Sie unter dem Mikroskop nach Nebenhodenspermien.
   4. Drehen Sie den Konverter des inversen Mikroskops weiter auf die 40-fach-Objektivlinse, drehen Sie die Feinfokusspirale, um die Brennweite einzustellen, und beobachten Sie die Nebenhodenspermien Feld für Feld. Bewerten Sie die Anzahl und Qualität der Nebenhodenspermien. Es ist zu erkennen, dass die normalen Nebenhodenspermien gereift sind und die Fähigkeit erlangt haben, sich zu bewegen.
2. Behandlung von Nebenhodenspermien
   1. Wenn Sie genügend aktive Nebenhodenspermien beobachten, übertragen Sie die Flüssigkeit in der Kulturschale durch eine sterile Pasteurpipette in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen.
   2. Stellen Sie das obige Zentrifugenröhrchen auf die Waagenschale und verwenden Sie ein Zentrifugenröhrchen der gleichen Spezifikation, das steriles Wasser enthält, um es zu nivellieren.
   3. Öffnen Sie die Zentrifugenklappe, setzen Sie die Zentrifugenröhrchen symmetrisch in den Kartensteckplatz ein und schließen Sie dann die Zentrifugenklappe. Stellen Sie die Zentrifugalkraft über das Bedienfeld auf 500 x g und die Zentrifugationszeit auf 5 min ein. Drücken Sie die Taste START auf dem Bedienfeld, um den Zentrifugationsprozess zu starten.
   4. Öffnen Sie nach Abschluss des Zentrifugationsvorgangs die Zentrifugentür und entfernen Sie das Zentrifugenröhrchen mit der Nebenhodenflüssigkeit. Schrauben Sie den Deckel ab, saugen Sie den Überstand vorsichtig mit einer sterilen Pasteurpipette ab und entsorgen Sie den gezogenen Überstand.
   5. Übertragen Sie mit einer sterilen Pasteurpipette ca. 2 ml G-IVF-PLUS-Kulturlösung in das Zentrifugenröhrchen. Pipettieren Sie dann die Lösung vorsichtig im Zentrifugenröhrchen, um sie gründlich zu resuspendieren.
   6. Wiederholen Sie den Vorgang des Ausbalancierens, Zentrifugierens und Entfernens der oberen Flüssigkeitsschicht.
   7. Entsprechend den Anforderungen der intrazytoplasmatischen Spermieninjektion (ICSI) übertragen Sie mit einer sterilen Pasteur-Pipette etwa 0,5 ml G-IVF-PLUS-Kulturlösung in das Zentrifugenröhrchen und blasen Sie die Nebenhodenspermien vorsichtig am Boden des Zentrifugenröhrchens auf, um es gründlich aufzuhängen.
   8. Verwenden Sie die gründlich suspendierten Nebenhodenspermien direkt für den ICSI-Prozess.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440<
Zentrifugenrohr	Falcon	352095	15 mL
Combination reagenzglas stand	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD<
Culture dish	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
Desinfektionslösung	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Schweden AB	511574<
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	Kulturlösung für Punktionsoperation
Hochsicherheits-Embryo-Pasteur-Pipetten<	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table		DZ202012010
Invertiertes optisches Mikroskop	OLYMPUS		IX71<
Lidocain hydrochloride injection<	H31021072	5 mL : 0.1 g
Medizin balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854<
Medical surgical masks	Guangzhou Stadt Panyu Bezirk Haozheng Fabrik für Gesundheitsmaterialien	161220328	17.5×9.5 cm (Auffaltgröße 17.5×17 cm)
Motorbetriebene Operationstabelle	Shandong Mingtai Medical Equipment Co., LTD	YZB0089-2011<
Self-Adhesive Wound Dressing	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)<
Sterile Injektionsspritzen zum Einmalgebrauch<	20230921	5 mL, ausgestattet mit einem 0.7mm (0.7 x 32TWLB)
Steriler puderfreier Latex-OP-Handschuh<	2023030322	71/2, 61/2
Surgical instruments package	Versorgungsabteilung des dritten angeschlossenen Krankenhauses der Sun Yat-sen Universität	10228376	Autoklav-Sterilisation<
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., Ltd	JSL2009-160D
Vertical flow clean table	Suzhou Wanda Purification Technology Co., Ltd	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

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