Dieses Video zeigt die Implantation eines Rückenmarksfensters in eine anästhesierte Maus für die in vivo Bildgebung. Das Protokoll stabilisiert das freiliegende Rückenmark mit einem Borosilikat-Deckglas und einer 3D-gedruckten Rückplatte. Diese Methode ermöglicht die hochauflösende Zwei-Photonen-Mikroskopie, um die Dynamik der Blut-Hirn-Schranke und neurovaskuläre Wechselwirkungen zu untersuchen.
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Methodenartikel
Implantation eines Rückenmarksfensters in einer Maus für die In-vivo-Bildgebung
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7. August 2025
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Deckglas-Implantation
:- Tragen Sie vorsichtig ein 3 mm starkes Deckglas aus Borosilikatglas auf die freiliegende Nabelschnur auf.
- Stellen Sie sicher, dass die Agarose auf 39 °C abgekühlt ist. Tragen Sie mit einem kleinen Spatel warme 2 % Agarose/aCSF (künstliche Zerebrospinalflüssigkeit) auf den Rand des Deckglases auf und lassen Sie sie durch Kapillarwirkung unter die Oberfläche ziehen.
Hinweis: Bei Temperaturen unter 39 °C kann die Agarose zu gelieren beginnen. In diesem Fall mi....
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Ergebnisse
Abbildung 1. Schematische Darstellung der anatomischen Platzierung des Rückenmarksfensters. A) Schematische Darstellung der superioren Ansicht eines unteren Brustwirbelkörpers, des Dornfortsatzes und des Rückenmarkssegments .......
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 3D-gedruckte ovale Rückplatte | benutzerdefiniert | Stabilisierendes Bildgebungsfeld | |
| Chirurgisches Präpariermikroskop | Leica | M205 C | Ausgestattet mit Leica FusionOptics, Planapo 0,63x M-Serie Objektiv und Gleittisch |
| Mikroskopkamera | Leica | MC170 | HD Farbkamera zur Visualisierung des Operationsfeldes |
| Gleittisch | Leica | 10446301 | Der Gleittisch besteht aus zwei Metallplatten. Die Grundplatte ist fixiert. Die obere Platte gleitet auf einer gefetteten Schnittstelle, um eine rotierende und lineare Bewegung zu ermöglichen. |
| Chirurgische Station und Stabilisierungsgabel | Whale Manufactoring | kundenspezifische | Laminektomie |
| SomnoSuite Low-Flow-Isofluran-Verabreichungseinheit | Kent Scientific | SS-01 | Chirurgische Anästhesieverabreichung mit integriertem digitalem Verdampfer |
| 1,5-Zoll-Montagepfosten aus Edelstahl | ThorLabs | P50/M | Zur Montage der Operationsstation auf einem optischen Tisch für die Zwei-Photonen-Bildgebung |
| Senkgabel für 1,5"-Montage Pfosten | ThorLabs | PF175 | Zur Stabilisierung der Operationsstation Halterung auf optischem Tisch für die Zwei-Photonen-Bildgebung |
| Idealer Knochen-Mikrobohrer | Harvard-Gerät | 72-6065 | Ausdünnung des Knochens für die Laminektomie |
| Wasserbad | Fisher Scientific | 15-462-10 | Wärmende Kochsalzlösung |
| Kauterpistole | FST | 18010-00 | Kauterisieren kleinerer Blutungen |
| Heizkissen | Benchmark | BF11222 | 1,9" x 4,5" Silikonheizung mit 20" Teflonleitungen, 10W, 5V |
| K Typ thermogekoppelte Rektumsonde | Physitemp | RET3 | Messung der Körpertemperatur der Maus |
| Vaseline | Sigma | 8009-03-08 | Schmierende Rektumsonde |
| Feedback-geregelter Thermoregler | kundenspezifisch | NA | Zu den im Handel erhältlichen Alternativen gehören die Physitemp TCAT-Serie |
| PVA Chirurgische Augenspeere | Biber-visitec international | 40400-8 | Absorbierendes Blut |
| Elektrischer Trimmer | Wahl | 41590-0438 | Trimmen von Mausfell |
| Klinge, #11 | FST | 14002-14 | Chirurgisches Werkzeug |
| Pinzette, #5 | FST | 11254-20 | Chirurgisches Werkzeug |
| Pinzette, #4 | FST | 14002-14 | Chirurgisches Werkzeug |
| Titatnium-Zahnzange | WPI | 555047FT | Chirurgisches Werkzeug |
| Titan-Iris-Schere | WPI | 555562S | Chirurgisches Werkzeug |
| Vetbond Gewebekleber | 3M | 084-1469SB | Vorbereitung der Gewebeoberfläche für dentales |
| Acryl Keramikmischtablett | Jack Richeson | 420716 | Mischen von zahnärztlichem Acrylmittel mit Beschleuniger |
| Orthojet Dental-Acryl | Lang Dental | 1520BLK, 1503BLK | Dauerhafte Bindung der Rückplatte an das Gewebe |
| Kleines rundes Deckglas, #1 Dicke, 3 mm | Harvard-Gerät | 64-0720 | optisches Fenster |
| NaCl | Fisher Scientific | 7647-14-5 | Für aCSF |
| KCl | Fisher Scientific | 7447-40-7 | Für aCSF |
| Glucose | Fisher Scientific | 50-99-7 | Für aCSF |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | Für aCSF |
| MgCl₂·6H₂O | Fisher Scientific | 7791-18-6 | Für aCSF |
| CaCl₂·2H₂O | Fisher Scientific style='text-align:center;'>################# | Für aCSF | |
| Carprofen | Rimadyl | QM01AE91 | Analgesie |
| Bakteriostatisches Wasser | Henry Schein | 2587428 | Verdünnungsmittel für Carprofen |
| Isofluran | Henry Schein | 11695-6776-2 | Anästhesie |
| Laktat-Ringerlösung | Baxter | 0338-0117-04 | Hydratation für Maus |
| Agarose High | EEO Sigma | A9793 | Gelpunkt 34-37 Grad C |
| Augenfeuchte Schmiersalbe | Akwa Tränen | 68788-0697 | Verhindern Sie das Austrocknen der Hornhaut |
| MOM Zwei-Photonen-Mikroskop | Sutter |
