Visualisierung neuronaler und vaskulärer Netzwerke in einem Hühnerembryo

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Delalande, J., et.al. Doppelte Markierung von Neuralleistenzellen und Blutgefäßen in Hühnerembryonen mittels^{Küken-GFP-Neuralrohrtransplantation} und Carbocyanin-Farbstoff-DiI-Injektion. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt die Transplantation eines GFP-markierten Spender-Neuralrohrs von einem transgenen Hühnerembryo in einen Empfängerembryo auf der Ebene der Somiten eins bis sieben, gefolgt von der Gefäßmarkierung mit einem lipophilen Fluoreszenzfarbstoff. Der kombinierte Ansatz ermöglicht die direkte Visualisierung des Embryos unter einem Stereofluoreszenzmikroskop und ermöglicht so die Untersuchung der Integration von neuralen Transplantaten und der Entwicklung des Gefäßnetzwerks bei Ovo.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Transplantieren Sie das Gewebe

Übertragen Sie das präparierte Neuralrohr vorsichtig mit einer Mikropipette aus dem Uhrglas auf den Wirtsembryo. Positionieren Sie das Neuralrohr in der richtigen anterior-posterioren Ausrichtung und schieben Sie das Explantat mit dem Mikroskalpell vorsichtig neben die exzidierte Region des Wirtskükens. Lassen Sie ein kleines Fragment des Ektoderms an der dorsalen Oberfläche befestigt oder schneiden Sie eine kleine Kerbe in die dorsale Oberfläche, um die Ausrichtu....

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Ergebnisse

Abbildung 1. Intravenöse DiI-Injektion. (A) Empfohlene Instrumente: a) CellTracker CM-DiI Tropfen auf Parafilm, b) gezogene Glasinjektionsnadel, c) Mundschlauch. (B) Schematische Darstellung der intravenösen DiI-Injektion in ein.......