Intrazerebroventrikuläre Behandlung mit Resiniferatoxin zur TRPV1-Desensibilisierung im Gehirn der Maus

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Fukushima, A., et al. Intrazerebroventrikuläre Behandlung mit Resiniferatoxin und Schmerztests bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2020)

Dieses Video zeigt das Verfahren zur intrazerebroventrikulären Injektion von Resiniferatoxin bei Mäusen zur Desensibilisierung der TRPV1-Rezeptoren im Gehirn.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Intrazerebroventrikuläre Injektion von RTX

Mäuse mit Pentobarbital-Natriumsalz (60 mg/kg, intraperitoneal) anästhesieren und auf Verlust des Aufrichtungsreflexes prüfen.
Für die intrazerebroventrikuläre (i.c.v.) Behandlung injizieren Sie 5 μl Resiniferatoxin (RTX) (20 μg/ml) in den rechten lateralen Ventrikel. Für die Kontrollgruppe ist das Vehikel (10 % Ethanol, 10 % Polyoxyethylen (20)-Sorbitanmonooleat und 80 % künstliche Zerebrospinalflüssigkeit (ACSF)) auf die gleiche Weise zu injizieren.
1. Führen Sie eine 27-G-Einwegnadel durch ein Metallröhrchen (0,8 mm Innendurchmesser), um die 3,0-3,5 mm Spitze der Nadel freizulegen (Abbildung 1A).
2. Desinfizieren Sie den Kopf der Maus mit 70% Alkohol und halten Sie die Plattenepithelknochen der Maus mit den Fingern fest (Abbildung 1B). Anmerkung: Achten Sie auf die Position der Plattenepithelvorsprünge, da diese Vorsprünge als Orientierungspunkte für die Injektion dienen.
3. Bewegen Sie die Nadel seitlich auf der Kopfhaut und finden Sie die sagittale Naht, während die Nadelspitze an der Naht eingehakt ist.
4. Bewegen Sie die Spitze etwa 1 mm nach rechts, bewegen Sie dann die Spitze rostral und suchen Sie die Kronennaht. (Abbildung 1B).
5. Führen Sie die Nadel langsam und senkrecht ein, injizieren Sie die RTX-Lösung in etwa 10 Sekunden und halten Sie sie etwa 10 Sekunden lang.
6. Ziehen Sie die Nadel langsam zurück und bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück. Die Blutung ist in der Regel minimal oder gar nicht vorhanden. Wenn schwere Blutungen auftreten, sollte die Verwendung einer anderen Maus in Betracht gezogen werden.

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Ergebnisse

Abbildung 1: Fotografische und schematische Ansichten der intrazerebroventrikulären (i.c.v.) Injektion. (A) Nadel für die i.c.v.-Injektion. (B) Schema des Mäuseschädels und die Bewegung der Nadelspitze. Platt...