Bewertung der neuroprotektiven Effekte der sauren Postkonditionierung in einem Mausmodell der zerebralen Ischämie

Abstract

Quelle:

Protocol

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO):
   1. Platzieren und fixieren Sie die anästhesierte Maus (mit einer Laser-Doppler-Flowmetrie-Sonde (LDF) am Schädel) in Rückenlage und halten Sie ihre Körpertemperatur mit einer Wärmelampe während der gesamten Operation aufrecht. Desinfizieren Sie den Hals mit 70%igem Ethylalkohol.
   2. Machen Sie mit einem Skalpell einen paramedianen Hautschnitt am Hals; stumpf präparieren Sie die Weichteile mit einer Pinzette, um die Gefäße freizulegen. Geben Sie einen Tropfen Kochsalzlösung in das freiliegende Gewebe, um es mit Feuchtigkeit zu versorgen.
   3. Präparieren Sie die Arteria carotis communis mit einer Augenzange vom umgebenden Gewebe und dem Vagusnerv. Achten Sie darauf, den Vagusnerv nicht zu beschädigen. Desinfizieren Sie die Haut des Halses erneut mit einem Jodophor, nachdem die Halsschlagader freigelegt wurde.
   4. Platzieren Sie eine Mikrogefäßklemme am distalen Ende der Arteria carotis communis und binden Sie dann einen toten Knoten mit 6-0 Seidennähten am proximalen Ende. Platzieren Sie die Klemme für nachfolgende Operationen so proximal wie möglich. Achten Sie darauf, dass die Länge des Gefäßes zwischen der Klemme und dem Totknoten für nachfolgende Vorgänge so lang wie möglich ist.
   5. Machen Sie eine provisorische Naht proximal zur Klemme, indem Sie einen losen Knoten binden. Stellen Sie sicher, dass zwischen zwei Knoten genügend Platz für das Monofilament-Einsetzen ist.
   6. Machen Sie mit einer Mikro-Ophthalmologischen Schere einen kleinen Längsschnitt zwischen den beiden Knoten. Stellen Sie sicher, dass der Schnitt für nachfolgende Operationen so nah wie möglich am toten Ast liegt. Achten Sie darauf, das Gefäß nicht abzuschneiden.
   7. Führen Sie ein 12 mm langes Monofilament mit abgestumpfter Spitze durch den Schnitt ein, um in das Arterienlumen einzudringen, und schieben Sie es einige mm vor. Ziehen Sie den losen Knoten um die Spitze des Monofils fest und entfernen Sie dann die Klemme.
   8. Schieben Sie das Filament mit einer Augenzange in die Arteria carotis interna (10 mm zum Verschluss der mittleren Hirnarterie) vor, bis die LDF-Software einen starken Rückgang des Blutflusses (>80 % gegenüber dem Ausgangswert) des Blutflusses anzeigt. Notieren Sie die Startzeit der Okklusion.
   9. Verschluss der mittleren Hirnarterie für 1 h. Schneiden Sie die LDF-Sonde ab und legen Sie die Mäuse für die Dauer des Verschlusses in einen 30 °C heißen Inkubator.
2. Reperfusion und saure Nachkonditionierung (APC):
   1. Betäuben Sie die Tiere wie oben beschrieben erneut mit Isofluran, 55 Minuten nach Beginn der Okklusion. Platzieren und fixieren Sie Mäuse in Rückenlage. Öffnen Sie den Halsschnitt und legen Sie die Arteria carotis communis wieder frei.
   2. Ziehen Sie das Filament nach der Okklusionsphase vorsichtig mit einer Augenzange heraus, um eine Reperfusion zu erreichen, und verwandeln Sie die provisorische Naht in eine dauerhafte, indem Sie den Knoten festziehen.
   3. Zur Azidosebehandlung ist das durch den Nasenkonus eingeatmete Gas 5, 50 oder 100 Minuten nach der Reperfusion 5 min lang auf das Gasgemisch mit 20 % CO₂, 20 % O₂ und 60 % N₂ umzustellen. Verschließen Sie den Schnitt mit einer unterbrochenen chirurgischen Naht.
   4. Setzen Sie die Mäuse in einen 30 °C heißen Käfig, bis die Mäuse das Bewusstsein wiedererlangt haben, und bringen Sie die Mäuse dann in saubere, einzelne Käfige zurück. Stellen Sie den Mäusen eine Petrischale mit Wasser und angefeuchtetem Futter zur Verfügung. Überwachen Sie die Mäuse nach der Operation genau auf übermäßige Schmerzen und Tod.

Materials