Methodenartikel

Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung

DOI:

10.3791/3184

⸱

19. November 2011

 ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Iowa, 2Omics Laboratory, University of Iowa, 3School of Dentistry, UCLA, 4Bernard and Shirlee Brown Glaucoma Laboratory, Department of Ophthalmology, College of Physicians and Surgeons, Columbia University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Dissektionstechnik zeigt Enukleation der Maus Auge für Gewebefixierung um Phänotypisierung in Hochdurchsatz-Screening durchzuführen.

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Maus Auge ist ein wichtiges genetisches Modell für die translationale Erforschung der menschlichen Augenerkrankung. Blendende Erkrankungen beim Menschen, wie Makuladegeneration, Photorezeptordegeneration, Katarakt, Glaukom, Retinoblastom, und diabetische Retinopathie haben in transgenen Mäusen wurde rekapituliert. 1-5 meisten transgenen und Knockout-Mäuse von Laboratorien erzeugt wurden auf nicht-ophthalmologische Krankheiten zu studieren, aber Generhaltung zwischen Organsysteme lässt vermuten, dass viele der gleichen Gene können auch eine Rolle bei der Entwicklung und okulare Krankheit. Daher stellen diese Mäuse eine wichtige Ressource für die Entdeckung neuer Genotyp-Phänotyp-Korrelationen in die Augen. Da diese Mäuse auf der ganzen Welt verstreut sind, ist es schwierig, zu erwerben, zu halten und Phänotyp sie in eine effiziente, kostengünstige Weise. So sind die meisten High-Throughput-ophthalmologische Phänotypisierung Bildschirmen auf wenige Standorte, die vor Ort, ophthalmologische Know-how erfordern beschränkt Augen in lebenden Mäusen zu untersuchen. 6-9 Ein alternativer Ansatz in unserem Labor entwickelt wurde, ist eine Methode für Remote Gewebe-Übernahme, die in großen oder kleinen Erhebungen der transgenen Maus Augen verwendet werden können. Standardisierte Verfahren für Video-basierte chirurgische Fachwissen, Gewebefixierung und Versand ermöglichen jedem Labor zu ganzen Augen von mutierten Tiere zu sammeln und senden Sie sie für molekulare und morphologische Phänotypisierung. In diesem Video Artikel präsentieren wir Techniken, um entkernen und übertragen sowohl fixierten und Perfusion festen Mäuseaugen für Remote Phänotypisierung Analysen.

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ein. Blunt Dissection: Enukleation der Maus Auge fixierten Proben

  1. Auseinanderziehen die Augenlider, um die Exposition und den Zugang zu den hinteren Globus (Augapfel) Oberfläche zu verbessern.
  2. Legen Sie eine gebogene Verband forcep hinter (unter) den Globus in der Umlaufbahn (Augenhöhle). Die Mahajan Sharptip Verband forcep ist ein Brauch Instrument mit Spitzen um diesen Schritt zu erleichtern (siehe Materialien und Reagenzien Tabelle).
  3. Schließen Sie die Zange und fassen Sie den Orbital Bindegewebe und Sehnerv hinter dem Globus, während sie vorsichtig, um zu vermeiden, drückte den Globus.
  4. Ziehen Sie die Zange nach oben und rei....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die meisten transgenen Mäusen gibt es in Laboratorien, die nicht prüfen müssen die Augen. Unsere Video-Technik stellt eine einfache, standardisierte Methode zur Remote-chirurgischen Fähigkeiten Übertragung von Gewebe Akquisition von Laboratorien mit wenig Erfahrung mit den Augen zu optimieren. Dieses Video-Technik hilft bei der Bewältigung einer großen Sünden in High-Throughput-Phänotypisierung, die Verwendung einer begrenzten Anzahl von Experten Standorten aufgrund der nicht-standardisierten Gewebe Sammlung und Fixieru.......

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Danksagungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Forschung zur Erblindung verhindern; Bartly J. Mondino MD, Direktor des Jules Stein Eye Institute, UCLA, und Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui White, and Jeanne Estabel am Sanger Institute, Wellcome Trust Genome Campus. Diese Forschung entspricht der ARVO Statement für die Verwendung von Tieren in Ophthalmic und Visual Research.

....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Name Firma Catalog Number Kommentare
Curved Dressing Forcep Storz Ophthalmics E1408
Mahajan Sharptip Verband forcep Storz Ophthalmics E1406 (REF SP7-64520)
Curved Westcott Schere Storz Ophthalmics E3321 WH
15 ° BD Beaver Mikrochirurgische Klinge Becton-Dickinson 374881
0,22 Fine-Castroviejo Naht-Zange Storz Ophthalmics E1805
0,12 Colibri Pinzette Storz Ophthalmics 2/132
30-Gauge-Nadel Becton-Dickinson 305128
Biohazard Mailer Fischer 03-523-4
Parafilm Fischer 13-374-10
Glasszintillationsröhrchen Wheaton 4500413033
PBS, pH 7.4 Invitrogen 70011-044
16% Paraformaldehyd Electron Microscopy Sciences 15700
2,5% Paraformaldehyd / 2,5% Glutaraldehyd in 0,1 M Natriumphosphatpuffer Electron Microscopy Sciences 15700 & 16300 Gemischt im Labor
50% Glutaraldehyd Electron Microscopy Sciences 16300
0,25% Formvar Electron Microscopy Sciences 15810
Polizistpro Slot Grid Electron Microscopy Sciences M2010-CR
4% Osmiumtetroxid Electron Microscopy Sciences 19140
Anti-SOD3 Antikörper Abcam Ab21974
Ziege anti-Kaninchen Alexa Fluor 488 Invitrogen A11070
Spurr die Einbettung von Harz Electron Microscopy Sciences 14300

Referenzen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
  2. Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. Cold....

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden

Genehmigung beantragen

Schlagwörter

Mouse Eye EnucleationTissue FixationRemote PhenotypingSurgical SpecimenOptic NerveConnective TissueScintillation VialParafilm PackagingBubble Wrap BagLiquid Laboratory Shipping

Verwandte Artikel