Visualisierung von zerebralen Thromben der Maus mittels Nahinfrarot-Fluoreszenzbildgebung

Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Kommission für ethische Überprüfung der Tiere überprüft und genehmigt.

1. Ex-vivo-Nahinfrarot-Fluoreszenz-Thrombus-Bildgebung (NIRF) des Hirngewebes

1. Entfernen Sie nach der Enthauptung die Kopfhaut und schneiden Sie mit einer Schere durch den Schädel vom Foramen magnum bis zur sagittalen Naht. Entfernen Sie das Schädelgewölbe, indem Sie die Ränder des eingeschnittenen Schädels vorsichtig mit einer Schere anheben, während Sie Verletzungen des darunter liegenden Gehirns vermeiden und so die Hemisphären freilegen.
2. Schneiden Sie die Sehnerven in der Gehirnbasis so nah wie möglich an der Gehirnoberfläche ab, da sie sich mit dem Kreis der Willis-Arterien (COW) überlappen könnten, der in der Nahinfrarot-Fluoreszenzbildgebung (NIRF) sichtbar gemacht werden sollte. Um dann die Y-förmige "mittlere Hirnarterie (MCA) / vordere Hirnarterie (ACA) / distale Arteria carotis interna (ICA)" für die NIRF-Thrombusbildgebung zu visualisieren, schneiden Sie die distalen ICAs so weit wie möglich zur Gehirnoberfläche aus, nachdem Sie die Kleinhirnbasis vorsichtig zusammengedrückt haben, um die Schnittpunkte freizulegen (Abbildung 1A).
3. Es wird eine NIRF-Bildgebung (Anregung/Emission, 675 / 690 nm; 1 Sekunde Exposition) des entnommenen Hirngewebes mit der Basis nach oben (Abbildung 1B, C) durchgeführt, die die fluoreszenzmarkierten Thromboembolien in den Arterien der COW sichtbar macht (Abbildung 1D). Führen Sie dann eine zusätzliche Bildgebung durch, bei der der Scheitelpunkt des Gehirns nach oben zeigt, wodurch kortikale Thromboembolien sichtbar werden. Vermeiden Sie das Austrocknen des Gehirns, indem Sie ein paar Tropfen Kochsalzlösung auf das Gewebe geben.

Abbildung 1: Überblick über die Ex Vivo Nahinfrarot-Fluoreszenzbildgebung (NIRF) von zerebralen Thromboembolien. (A und B) Einer Maus mit einem thromboembolischen Schlaganfall wurde repräsentatives Hirngewebe entnommen. Treffen Sie Vorsichtsmaßnahmen, um bei der Entfernung des Gehirns keine Thromboembolien (roter Pfeil) im Bifurkationsbereich der mittleren Hirnarterie (MCA) – vordere Hirnarterie (ACA) der distalen Arteria carotis interna (ICA, blaue Pfeile) zu verlieren. (C und D) Ex vivo NIRF-Thrombus-Bildgebung. Das Hirngewebe wird in die lichtdichte Kammer eines NIRF-Imagers (C) gebracht, um den Thrombus (roter Pfeil in D) sichtbar zu machen, der mit dem Cyanin 5.5 (Cy5.5) Fluoreszenzmarker C15 vormarkiert ist, bevor es zu einem embolischen Verschluss des MCA-ACA-Bifurkationsbereichs kommt.