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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Biolumineszenz-Bildgebung von GL261 Tumorwachstum
- Sprühen Sie eine großzügige Menge Desinfektionsmittel (0,05 % Dimethylammoniumchloridlösung) auf ein sauberes Papiertuch. Verwenden Sie das mit Desinfektionsmittel getränkte Papiertuch, um das schwarze Blatt, die Nasenkegel und die Trennwand in der Bildgebungskammer, in der die Tiere mit dem Gerät in Kontakt kommen, gründlich abzuwischen. Wischen Sie alle Oberflächen gründlich mit einem sauberen, trockenen Papiertuch ab. Wiederholen Sie dies noch einmal und warten Sie 5 Minuten.
- Initialisieren Sie die Imaging-Station.
- Betäuben Sie die Maus mit einer 300-μl-Mischung, die 200 μl Ketamin/Xylazin und 100 μl Luciferin (D-Luciferin-Kaliumsalz, 150 mg/kg) enthält, durch intraperitoneale Injektion.
- Warten Sie 10 Minuten nach der Injektion und bestätigen Sie, ob die Mäuse vollständig unter Narkose stehen, indem Sie den Schwanz einklemmen. Um das Bildgebungssystem einzurichten, wählen Sie "Lumineszenz", "Auto" Belichtungszeit und "Mittel" Binning. Platzieren Sie die Mäuse auf der Bildgebungsstation und klicken Sie auf die Schaltfläche "Erfassen", um das Bild zu starten. Stellen Sie sicher, dass die Zeit nach der Injektion mit jeder Bildgebungssitzung übereinstimmt.
- Nachdem das Bild erfolgreich aufgenommen wurde, sollten ein Bildfenster und eine Werkzeugpalette angezeigt werden. Klicken Sie auf den Interessenbereich (ROI) oder "ROI-Tools" und wählen Sie "Auto" aus dem Kreissymbol aus. Um ROIs zu definieren, kreisen Sie den Signalbereich auf dem Bild ein und messen Sie dann den ROI als Einheit von Photonen/sec/sr/cm2.
- Nehmen Sie die Mäuse aus der Bildgebungskammer und überwachen Sie sie, bis sie ambulant werden und ihre normale Aktivität beibehalten. In der Regel beträgt die Wiederherstellungszeit ca. 15 Minuten. Bringen Sie die Mäuse nicht mit anderen Tieren in den Käfig zurück, bis sie sich vollständig von der Narkose erholt haben.
- Überwachen Sie das Tumorwachstum zweimal pro Woche durch Biolumineszenz-Bildgebung, bis die Tiere die folgenden Symptome aufweisen: Gewichtsverlust (Verlust von mehr als 20 % bezogen auf das Gewicht vor der Implantation), Appetitlosigkeit (vollständige Magersucht für 24 Stunden) und Mangel an anhaltender zielgerichteter Reaktion auf sanfte Reize (schwacher Versuch aufzustehen), woraufhin sie eingeschläfert werden sollten.
- Normalisieren Sie die Lumineszenzwerte für jeden Tag mit den entsprechenden Messwerten, die am ersten Tag der Biolumineszenzbildgebung erhalten wurden (Abbildung 1A).
- Für die statistische Analyse generieren Sie Überlebenskurven mit dem Kaplan-Meier-Schätzer und vergleichen Sie die Unterschiede zwischen den Überlebenskurven mit einem Log-Rank-Test.
