Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden von der örtlichen institutionellen Tierpflegekommission und der tierärztlichen Prüfstelle der JoVE überprüft.
1. Intramuskuläre Injektionen an den Motorendplatten
- Ziehen Sie Mikropipetten aus Glas mit einem Mikropipettenabzieher (die Verwendung von abgestuften Mikropipetten mit Kolben wird empfohlen). Brechen Sie mit Hilfe eines Präpariermikroskops die Spitzen der Mikropipetten mit einer Pinzette so, dass der Innendurchmesser des Lumens der Mikropipette etwa 0,5 mm beträgt.
- Stellen Sie sicher, dass alle verwendeten chirurgischen Instrumente frisch autoklaviert sind und dass der Operationsbereich steril ist.
- Füllen Sie die Mikropipetten mit Fluor-Gold (5% in destilliertem Wasser).
- Induzieren Sie die Anästhesie des Tieres mit Isofluran (4% in O2) in einer Induktionskammer. Überprüfen Sie, ob der Aufrichtungsreflex vorhanden ist, und stellen Sie sicher, dass er nicht vorhanden ist, bevor Sie ihn aus der Induktionskammer nehmen. Befestigen Sie einen Nasenkegel über der Schnauze der Ratte und geben Sie Isofluran (2% in O2) zur Aufrechterhaltung der Anästhesie ab. Kneifen Sie die Zehen des Tieres ein und berühren Sie vorsichtig das Auge des Tieres, um sicherzustellen, dass sowohl der Pedalzug als auch die Hornhautreflexe fehlen.
HINWEIS: Eine Mischung aus Ketamin und Xylazin kann ebenfalls verwendet werden (80 bzw. 10 mg/kg intraperitoneal verabreicht). Ketamin ist eine Droge der Liste 8 ("kontrolliert"), und die notwendigen Protokolle im Zusammenhang mit dem Kauf, der Verwendung, der Lagerung und der Entsorgung der Droge müssen eingehalten werden. - Tragen Sie Augengleitmittel auf, um ein Austrocknen der Augen während des Eingriffs zu verhindern.
- Rasieren Sie die Zielgliedmaße und wischen Sie die rasierte Stelle mit Gaze mit drei abwechselnden Peelings aus Chlorhexidin und 70% Alkohol ab. Bringen Sie das Tier in den Operationsbereich.
- Setzen Sie das Tier auf eine saubere Unterlage und positionieren Sie es entsprechend, um einen guten Zugang zu dem/den Zielmuskel(n) zu gewährleisten.
- Heben Sie die Haut mit einer Pinzette mit Zahngriffen über den Zielmuskel von der darunter liegenden Muskulatur weg und machen Sie mit einer chirurgischen Schere einen Schnitt in die Haut. Stellen Sie sicher, dass der Schnitt groß genug ist, um den/die interessierenden Muskel(n) vollständig freizulegen. Stellen Sie sicher, dass die Faszien nur minimal gestört werden.
- Verwenden Sie die Fotos der motorischen Endplatte (MEP), um die Position und Form der MEP-Region mental auf den Muskel bzw. die Muskeln zu übertragen.
HINWEIS: Ein feiner Filzmarker kann dabei helfen, die MEP-Region aus dem Foto auf den oder die interessierenden Muskel(n) zu reproduzieren. - Führen Sie mehrere Injektionen über die gesamte Länge des MEP-Bereichs durch (für Fluor-Gold sollten 3 bis 4 Injektionen à 1-2 μl ausreichend sein). Wischen Sie den/die Muskel(n) vorsichtig ab, um eventuelles Durchsickern zu entfernen.
- Bringen Sie die beiden Enden der eingeschnittenen Haut mit einer stumpfen Pinzette eng zusammen und verschließen Sie die Wunde mit chirurgischen Klammern. Infiltrieren Sie 0,1 ml Bupivacain (0,5 % in Wasser) (oder andere Lokalanästhetika) über die gesamte Wundspanne.
- Schalten Sie das Narkosegerät aus und überwachen Sie das Tier, bis es sich vollständig von der Narkose erholt hat.
- Warten Sie 14 Tage zwischen der Verabreichung der intramuskulären Injektionen und der Perfusion der Tiere.
