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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Vorbereitung der Tiere
Hinweis: Tiere, die leichte Verletzungen erleiden müssen, müssen in der Nacht vor der Fernischämie an die Dunkelheit angepasst werden. Tiere, die Lichtschäden erleiden, müssen dunkel aufgezogen werden (12 Stunden Licht: Dunkelzyklus, 5 Lux)
Führen
- Sie eine Fernischämie entweder bei wachen oder narkotisierten Nagetieren durch. Stellen Sie sicher, dass die Tiere einen gesunden Muskeltonus haben. Stellen Sie dies sicher, indem Sie die obere hintere Extremität einklemmen, um sicherzustellen, dass ausreichend Muskeln vorhanden sind. Der RIP-induzierte Schutz vor leichten Verletzungen wurde an sitzenden Ratten bis zu einem Alter von 6 Monaten getestet.
- Anästhesiepräparat für die ischämische Fernpräkonditionierung (RIP)
- Injizieren Sie Ratten eine intraperitoneale Injektion von 60 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin. Überprüfen Sie die Narkosetiefe, indem Sie das Bein ausstrecken und die Haut an der Unterseite des Fußes einklemmen. Das Tier hat keinen Reflex, wenn es tief betäubt ist. Tragen Sie künstliche Tränen auf, um Trockenheit der Hornhaut während der Narkose zu vermeiden.
- Legen Sie die Ratten entweder auf ein Heizkissen oder einen zirkulierenden Warmwasserbereiterschlauch, um eine konstante Körpertemperatur von 37,5 °C zu halten. Positionieren Sie die Ratte in Bauchlage mit den Fußballen der unteren Gliedmaßen nach oben. Entweder die rechte oder die linke Extremität können eine Fernischämie erfahren.
2. Anwendung der Hauttemperatursonde
:
- Strecken Sie das Bein der Ratte, die sich einer Ischämie unterziehen soll, aus und platzieren Sie die Hautsonde auf dem Fußpolster. Positionieren Sie die Hautsonde so, dass der Kontakt zwischen der Temperatursonde und der Haut maximiert wird. Schieben Sie die Sonde fest in das Fußpolster und befestigen Sie die Sonde mit Papierklebeband.
- Überprüfen Sie die Platzierung der Hautsonde, indem Sie die Temperatur in der Temperaturaufzeichnungssoftware verfolgen. Achten Sie darauf, dass die Hauttemperatur zwischen 30-34 °C liegt und stabil bleibt. Verfolgen Sie die Hauttemperatur für 1-2 Minuten. Stellen Sie den Hautfühler ein, wenn die Temperatur instabil oder unter 30 °C liegt.
3. Fern-Ischämie
- : Lassen Sie die Luft aus der Manschette und stellen Sie sicher, dass das Luftdruckventil geschlossen ist. Strecken Sie das Bein aus und umschließen Sie locker die Manschette an der oberen hinteren Extreme. Mit Zeigefinger und Daumen streckst du das Bein und mit den unteren Fingern die gelockerte Manschette in Position.
- Erhöhen Sie den Manschettendruck des anästhesierten Tieres auf 160 mmHg und bei wachen Tieren den Manschettendruck auf 180 mmHg.
Hinweis: Der anästhesierte Blutdruck von Ratten liegt zwischen 120 und 140 mmHg und steigt bei Bewusstsein auf 160 mmHg an. Beginnen Sie mit der Aufzeichnung des Timers und der Fußtemperatur, sobald der richtige Druck erreicht ist.
Hinweis: Die Fußtemperatur sollte nach 5 Minuten konstantem Druck um 2 °C sinken. - Halten Sie die Position der Manschette über dem "Knie" des Tieres während der gesamten Ischämie. Der Druck auf die Manschette beginnt nach einigen Minuten zu sinken oder wenn sich das Glied der Ratte bewegt.
- Pumpen Sie den Aufblaskolben wiederholt in kurzen Stößen, um den gewünschten Manschettendruck aufrechtzuerhalten Wiederholte kurze Pumpstöße
Die - Fernischämie kann zwischen 5 und 15 Minuten lang kontinuierlich abgegeben werden. Das Ischämie-Reperfusionsprotokoll umfasst 2 Perioden mit 5-minütiger Ischämie und einer dazwischen liegenden 5-minütigen Reperfusion.
- Lassen Sie den Manschettendruck ab, indem Sie das Luftdruckventil lösen. Überprüfen Sie die Temperaturänderung im Verlauf des Ischämieprotokolls. Löse die Manschette.
- Fahren Sie mit dem Experimentieren mit Verletzungen fort. Tiere, die unter Narkosewirkung stehen, müssen auf ein Wärmekissen gelegt werden. Überwachen Sie die Tiere weiter, bis sie ambulant sind. Tiere können erst nach dem Spaziergang in die Ställe zurückgebracht werden.