Formulierung eines Dopamin-beladenen Exosomen-Trägersystems

Zusammenfassung

Quelle: Yavuz, B., et al. Formulierung und Charakterisierung eines Dopamin-Trägersystems auf Exosomenbasis. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt die Formulierung von Dopamin-beladenen Exosomen, wobei der Schwerpunkt auf der Saponin-induzierten Membranpermeabilisierung liegt, um die Dopaminverkapselung in Exosomen zu verbessern.

Protokoll

1. Dopaminbeladung in Exosomen

HINWEIS: Nachdem die Charakterisierung der Exosomen der mesenchymalen Stammzellen von Wharton's Jelly (WJ-MSCs) abgeschlossen ist, wurden Dopamin-beladene Exosomen als Wirkstoffabgabesystem erhalten. Das Laden von Medikamenten in Exosomen erfolgt nach der Inkubationsmethode.

1. Geben Sie 3 ml phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in die Exosomensuspension. Die verdünnte Suspension wird durch Filtration mit 0,22-μm-Filtern sterilisiert. Übertragen Sie 500 μl der sterilisierten Exosomensuspension in ein anderes Röhrchen.
2. Bereiten Sie Dopaminlösung (0,5 mg/ml) mit destilliertem Wasser vor. Geben Sie 500 μl Dopaminlösung in die Röhrchen mit den Exosomen.
3. Geben Sie in Schritt 1.2 Saponin in die Suspension. Die vorbereitete Exosom-Dopamin-Suspension wird 24 Stunden lang bei 37 °C inkubiert. HINWEIS: Die Saponinkonzentration sollte 0,002 % der Gesamtlösung nicht überschreiten.
4. Die Suspension wird 70 Minuten lang bei 90.000 × g ultrazentrifugiert, um freies Dopamin und Saponin aus dem Medium zu entfernen. Lagern Sie die isolierten Exosomen bis zur Verwendung für die weitere Analyse bei -20 °C. Anmerkung: Fügen Sie 0,02% Ascorbinsäure für die Stabilität der zubereiteten Dopaminlösung hinzu.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
0.22 μm Membranfilter	Aisimo		Wird für den Sterilisationsprozess
verwendet 15 mL Falcon tube	Nest		Wird im Zellkulturschritt
verwendet 50 mL Falcon tube	Nest		Wird in der Zelle verwendet Kulturschritt
Zentrifugal	Hitachi	CF16RN	Wird in der Exosomenisolationsstufe
Dopaminhydrochlorid H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Wird in der Exosomen-Dopaminbeladung verwendet
Optima XPN-100 Ultrazentrifuge	Beckman-Schar		Wird in der Exosomenisolationsstufe
verwendet PBS-Tablette	Biomatik	43602	Bei der Herstellung der PBS-Lösung
Saponin	Sigma	47036-50G-F	Es wurde verwendet, indem es der Gesamtlösung im Exosom-Dopamin-Ladeprozess zugesetzt wurde.
Wharton-Gelee-mesenchymale Stammzellen	ATCC

verwendet