Formulierung eines Dopamin-beladenen Exosomen-Trägersystems

Zusammenfassung

Quelle: Yavuz, B., et al. Formulierung und Charakterisierung eines Dopamin-Trägersystems auf Exosomenbasis. J. Vis. Exp. (2022)

Dieses Video zeigt die Formulierung von Dopamin-beladenen Exosomen, wobei der Schwerpunkt auf der Saponin-induzierten Membranpermeabilisierung liegt, um die Dopaminverkapselung in Exosomen zu verbessern.

Protokoll

1. Dopaminbeladung in Exosomen

HINWEIS: Nachdem die Charakterisierung der Exosomen der mesenchymalen Stammzellen von Wharton's Jelly (WJ-MSCs) abgeschlossen ist, wurden Dopamin-beladene Exosomen als Wirkstoffabgabesystem erhalten. Das Laden von Medikamenten in Exosomen erfolgt nach der Inkubationsmethode.

1. Geben Sie 3 ml phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) in die Exosomensuspension. Die verdünnte Suspension wird durch Filtration mit 0,22-μm-Filtern sterilisiert. Übertragen Sie 500 μl der sterilisierten Exosomensuspension in ein anderes Röhrchen.
2. Bereiten Sie Dopaminlösung (0,5 mg/ml) mit destilliertem Wasser vor. Geben Sie 500 μl Dopaminlösung in die Röhrchen mit den Exosomen.
3. Geben Sie in Schritt 1.2 Saponin in die Suspension. Die vorbereitete Exosom-Dopamin-Suspension wird 24 Stunden lang bei 37 °C inkubiert. HINWEIS: Die Saponinkonzentration sollte 0,002 % der Gesamtlösung nicht überschreiten.
4. Die Suspension wird 70 Minuten lang bei 90.000 × g ultrazentrifugiert, um freies Dopamin und Saponin aus dem Medium zu entfernen. Lagern Sie die isolierten Exosomen bis zur Verwendung für die weitere Analyse bei -20 °C. Anmerkung: Fügen Sie 0,02% Ascorbinsäure für die Stabilität der zubereiteten Dopaminlösung hinzu.

Materialien