Dieses Video zeigt die Präparation, Immunfärbung und Bildgebung von neuromuskulären Verbindungen im Muskelgewebe von Ratten mit konfokaler und superauflösender Mikroskopie zur Visualisierung und Analyse präsynaptischer und postsynaptischer Strukturen.
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Methodenartikel
Charakterisierung neuromuskulärer Verbindungen in Mäusen durch kombinierte konfokale und superauflösende Mikroskopie
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17. Juni 2025
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Kommission für ethische Überprüfung der Tiere überprüft und genehmigt.
1. Vorbereitung
1. Toupieren Sie jeden Muskel in kleinen Faserbündeln von etwa 1 mm Breite mit zwei feinen gezackten Pinzetten.
HINWEIS: Es ist entscheidend, die Muskeln sehr sanft mit der Pinzette zu manipulieren, ohne übermäßige Kraft, um Gewebeschäden während des Neckens zu vermeiden.
1. Dissoziieren Sie den Musculus tibialis anterior (TA) je nach Größe in 3 oder 4 Bündel.
2. Bei Gastr....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Puffer und Reagenzien | |||
| Alexa Fluor 488 Anti-Maus-IgG (F488) | Life Technologies, Thermofisher | A-11001 | |
| Alexa Fluor 488 α-Bungarotoxin (F488-a-BTXLife | Technologies, Thermofisher | B13422 | |
| Alexa Fluor 594 Anti-Maus-IgG für Ziegen (F594) | Life Technologies, Thermofisher | A-11032 | |
| ATTO-633 α-Bungarotoxin (F633-a-BTX) | Alomone Labs | B-100-FR | |
| Rinderserumalbumin (BSA) | Sigma | A2153 | |
| DAPI Fluoromount-G | Southern Biotech | 00-4959-52 | |
| Dulbecco-Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (DPBS) | Gibco, Invitrogen | 14190-169 | |
| Ethanol absolut | VWR | 20821.296 | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | |
| Immersionsöl, n = 1.518 | THORLABS | MOIL-10LF | |
| Neurofilament-Antikörper (NF-M) | DSHB | AB_531793 | |
| Paraformaldehyd (PFA) | MERCK | 1.04005 | |
| Synaptischer Vesikel-Glykoprotein 2 (SV2)-Antikörper | DSHB | AB_2315387 | |
| Materialien | |||
| Alnico Button zylindrische Magnete | Farnell Frankreich | E822 | Durchmesser von 19,1 mm mit maximalem Zug von 1,9 kg |
| 63x 1,4 NA Magnitude Ölimmersion HCX Plan Apo CS Objektiv | Leica Microsystems | ||
| 100x 1,4 NA HC PL APPO CS2 Objektiv | Zeiss | ||
| Feine Zange | Euronexia | P-95-AA | |
| Gebogene dünne Pinzette-Moria Iris Pinzette | Fine Science Tools | 11370-31 | |
| Extra dünne Schere - Vannas-Tübingen Federschere | Fine Science Tools | 15-003-08 | |
| Gelladespitze rund 1-200 μL | COSTAR | 4853 | |
| Leica Laser-Scanning Konfokalmikroskop TCS SP8 | Leica Microsystems | ||
| Leica Laser-Scanning Konfokales Mikroskop TCS SP8 Gated STED775 nm | Leica Microsystems | ||
| Reinigungstuch für Linsen | Whatman (GE Healthcare) | 2105-841 | |
| Superfrost plus Objektträger | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Mittelgroße Zange mit Wellenschliff | Euronexia | P-95-AB | |
| Mikroskop-Deckglas 24x50 nm Nr. 1,5 H 170±5 μm | Marienfield | 107222 | Hochpräzise |
| Nunclon-Delta-Oberfläche (12- Well-Platten) | Thermo Scientific | 150628 | |
| Nunclon-Delta-Oberfläche (24-Well-Platten) | Thermo Scientific | ||
| Software | |||
| GraphPad | Prism, San Diego (USA) | Release N°6.07 | Statistische Software |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | Release N° 1.53f | |
| Leica Application Suite X Software | Leica Microsystems | Release N°3.7.2.2283 | Kostenlose Mikroskop-Softwareerhältlich bei https://www.leicamicrosystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/downloads/ |
