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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Mausmodell des Verschlusses der mittleren Hirnarterie (MCAO)
- Verwenden Sie männliche C57BL/6-Mäuse im Alter von 6 Wochen und einem Gewicht von 22-25 g. Geben Sie allen Tieren freien Zugang zu Standardfutter und Wasser und halten Sie sie in einer Umgebung mit kontrollierter Temperatur (22 ±1°C) und einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus.
- Teilen Sie die Mäuse in Gruppen von jeweils sechs Mäusen auf, die aus scheinoperierten Normal-, Kontroll- und Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex)-Behandlungsgruppen bestehen sollten.
- Führen Sie eine MCAO-Operation an der Kontroll- und GRex-Behandlungsgruppe mit einem Stereomikroskop durch.
- Induzieren Sie bei den Mäusen eine Inhalationsanästhesie mit 2 % Isofluran in 70 % Distickstoffmonoxid (N₂O) und 30 % Sauerstoff (O₂). Eine Anästhesie wird als ausreichend angesehen, wenn die Maus nicht mehr auf einen mechanischen Reiz reagiert, der auf ihren Schwanz ausgeübt wird. Halten Sie die Körpertemperatur der Mäuse auf 36,5 ± 0,5 °C mit einer Decke, die die Körpertemperatur hält und mit einem Thermometer verbunden ist.
- Entfernen Sie alle Haare an Brust und Hals der Mäuse, indem Sie sich rasieren, gefolgt von der Verwendung von Haarentfernungscreme. Desinfizieren Sie die Operationsstelle der Haut mit einem Betadin-Peeling abwechselnd mit Alkohol und machen Sie dann einen ca. 2 cm langen Schnitt mit einer chirurgischen Klinge in der Mitte des Halses. Isolieren Sie vorsichtig die linke Arteria carotis communis (LCCA), die Arteria carotis externa und den Ast der Arteria carotis interna vom umgebenden Bindegewebe.
- Lilizieren Sie die Arteria carotis externa und die Arteria carotis communis mit einer chirurgischen Naht (4-0 Seidennaht, halber Kupplungsknoten), um den Blutfluss in die Arteria carotis interna während der Operation vorübergehend zu blockieren.
- Führen Sie eine silikonbeschichtete Nylonnaht (8-0 monofil, 11 mm lang) durch die Arteria carotis interna bis zum Ursprung der linken MCA ein. Stellen Sie die Dicke des silikonbeschichteten Teils des Filaments auf einen Bereich von 0,10-0,12 mm ein.
- Messen Sie die Abnahme des relativen zerebralen Blutflusses (rCBF) im MCA mit einem Laser-Doppler-Durchflussmesser. Die MCAO wird bestätigt, wenn die rCBF während der gesamten ischämischen Periode bei < 20 % der Ruhezustandswerte gehalten wird.
- Fixieren Sie das eingeführte Filament 2 Stunden lang am Blutgefäß, während die Hirnarterie verschlossen ist, und ziehen Sie das Filament dann vorsichtig zurück, um den Blutfluss für 22 Stunden der Reperfusion wiederherzustellen. Nähen Sie die Haut, indem Sie an fünf Stellen nähen (3-0 Seidennaht, zwei halbe Knoten) und lassen Sie jede Maus aus der Narkose erwachen.