Induktion und Überwachung von Adoptive Allergien vom verzögerten Typ in Ratten

Zusammenfassung

Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine entzündliche Reaktion durch CCR7-Effektor-Memory-T (TEM)-Lymphozyten vermittelt. Hier zeigen wir, wie um Antigen-spezifische TEM-Zellen zu aktivieren, bewegen Adoptiveltern DTH in Lewis-Ratten und überwachen die entzündliche Reaktion.

Zusammenfassung

Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine entzündliche Reaktion durch CCR7-Effektor-Memory-T-Lymphozyten, dass der Injektionsstelle eines Antigens, gegen die das Immunsystem grundiert hat infiltrieren vermittelt. Die Entzündungsreaktion wird durch Rötung und Schwellung der Website von antigenen Herausforderung geprägt. Es ist eine bequeme Modell, um die in vivo Wirksamkeit von Immunsuppressiva zu bestimmen. Kutane DTH kann entweder durch adoptiven Transfer von Antigen-spezifischen T-Lymphozyten oder durch aktive Immunisierung mit einem Antigen, und die anschließende intradermal Herausforderung mit dem Antigen auf die entzündliche Reaktion in einem bestimmten Hautareal hervorrufen induziert werden. DTH-Reaktionen können auf verschiedene Antigene hervorgerufen werden, z. B. Ovalbumin, Tuberkulin-, Tetanus-Toxoid, oder Keyhole Limpet Hämocyanin. Solche Reaktionen können auch gegen Autoantigen induziert werden, zum Beispiel um basisches Protein (MBP) in Ratten, die mit experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis induziert mit MBP, einem Tiermodell für Multiple Sklerose (1) Myelin. Hier zeigen wir, wie ein Adoptiv-DTH-Reaktion in Lewis-Ratten zu induzieren. Wir werden zunächst zu stimulieren Ovalbumin-spezifischen T-Zellen in vitro und injizieren diese aktivierten Zellen intraperitoneal naive Ratten. Nachdem die Zellen in vivo für 2 Tage ins Gleichgewicht, werden wir die Ratten mit Ovalbumin in der Ohrmuschel eines Ohres Herausforderung, während das andere Ohr wil erhalten Kochsalzlösung. Die entzündliche Reaktion sichtbar sein wird 3-72 Stunden später und die Dicke der Ohren wird als Indiz für DTH Schwere gemessen werden.

Protokoll

1. Die Stimulation der Ovalbumin-spezifischen T-Lymphozyten

Ruhe-Ovalbumin-spezifischen T-Zellen sind mit Ovalbumin in Gegenwart von bestrahlten Lewis Ratten-Thymozyten (30 Gy) als Antigen-präsentierende Zellen (APC), in Stimulation Medium (Prepare in DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA RPMI Vitamine angeregt + + 2ME Rattenserum + Ovalbumin, die Endkonzentrationen bemerkt in der Stückliste.)

Rattenserum Vorbereitung

1. Wir nehmen Serum von Ratten wir als Thymus Spender zu opfern.
2. Ratten sind tief narkotisiert durch Halothan Einatmen und so viel Blut wie möglich durch kardiale Perfusion (5-10 ml....

Diskussion

Die antigene Herausforderung kann auch an anderen Standorten durchgeführt werden, zum Beispiel in der Haut des Rückens (2). Wir finden jedoch, dass eine Herausforderung. Mit der Ohrmuschel, wie in diesem Video gezeigt, ermöglicht die präzise Messung der DTH-Reaktion.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
DMEM	GIBCO, von Life Technologies	12430-062	500 ml
Natriumpyruvat	Sigma-Aldrich	S8636	1 mM endgültig, im Stimulationsmedium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamin	Cambrex/BioWhittaker	17-718R	jeweils 100 U/ml - 100 μg/ml - 4 mM endgültig im Stimulationsmedium
Nichtessentielle Aminosäuren	Sigma-Aldrich	R7131	NEAA, 1 % endgültig, im Stimulationsmedium
RPMI-Vitamine	Sigma-Aldrich	R7256	1 % endgültig, im Stimulationsmedium
Beta-Mercapto–ethanol	Sigma-Aldrich	M6250	2-ME, 50 μM endgültig, im Stimulationsmedium
Syngenes Rattenserum			1 % endgültig. Siehe Erklärung im Protokoll.
Ovalbumin	Sigma-Aldrich	A5503	10 μg/ml endgültig, im Stimulationsmedium.