Unser Protokoll zeigt, wie mehrere Proteingele zu einer Zeit, gießen durch Recycling Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassetten und kostengünstige Materialien zu einem Baumarkt gekauft. Dieses wirtschaftliche und optimierte Verfahren umfasst einen Weg, um die Gele bei 4 ° C lagern für ein paar Wochen. Durch die Wiederverwendung der Kunststoff-Gel-Kassetten aus kommerziell erhältlichen Gelen, Labors, die häufige Proteingele laufen können erhebliche Kosten sparen und die Umwelt schonen.
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Methodenartikel
Gießen und Ausführen eines Protein-Gel durch die Wiederverwendung von Gewerbe-Kassetten
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Auswertung der Proteine mit Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE-Analyse) ist eine gängige Technik der Biochemie und Molekularbiologie Forscher 1-4 verwendet. Für Laboratorien, die täglich Analyse von Proteinen führen, können die Kosten für im Handel erhältliche Polyacrylamidgelen (~ $ 10/gel) beträchtlich sein im Laufe der Zeit. Um diese Kosten zu mindern, bereiten einige Forscher ihre eigenen Polyacrylamidgelen. Traditionelle Methoden der Ausgießen dieser Gele verwenden üblicherweise spezialisierte Ausrüstung und Glas-Gel-Platten, die teuer und schließt Gießen viele Gele und speichert sie für eine zukünftige Verwendung kann. Darüber hinaus kann der Handhabung von Glasplatten bei der Reinigung oder Gel in Gießen versehentlichem Bruch schafft ein Sicherheitsrisiko darstellen, was ihren Einsatz in Labor Undergraduate-Klassen ausschließen kann zur Folge haben. Unser Protokoll zeigt, wie mehrere Proteingele gleichzeitig gießen Recycling von Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassetten, und preiswert maMaterialien gekauft zu einem Baumarkt. Dieses wirtschaftliche und optimierte Verfahren umfasst einen Weg, um die Gele bei 4 ° C lagern für ein paar Wochen. Durch die Wiederverwendung der Kunststoff-Gel-Kassetten aus kommerziell erhältlichen Gelen, Labors, die häufige Proteingele laufen können erhebliche Kosten sparen und die Umwelt schonen. Darüber hinaus sind Kunststoff Gelkassetten extrem bruchfest, was sie ideal für Bachelor-Labor Klassenzimmer macht.
Protokoll
1. Vorbereitung der Kassetten
- Saubere Vorder-und Rückseite eines gebrauchten Platten Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassette, oder andere Geschäfte Minigel Kassette.
- Bereiten Sie etwa 1-3 ml Kunststoff Epoxy und gut mischen nach Anweisungen des Herstellers.
- Anwenden das Epoxidharz auf die Innenkante der Frontplatte, wobei die beiden Platten in Berührung kommen wird, wenn die Kassette montiert ist.
- Schieben ein Stück Filterpapier Papier oder Karton durch den Bodenschlitz der Rückplatte bei der Montage der Kassette, um überschüssiges Epoxidharz von Abdichten der Öffnung zu verhindern. Entfernen Sie das Filterpapier, sobald die ....
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Diskussion
Protein-Gel-Elektrophorese ist eine unverzichtbare Methode für die meisten molekularbiologischen Laboratorien. Im Handel erhältliche Minigelen bieten ein hohes Maß an Komfort, sondern kann teuer werden. Hier zeigen wir, wie man die Wiederverwendung der Minigel Kassetten aus einer populären Marke im Handel erhältliche Minigelen. Dieses Verfahren hält die Einfachheit eines vorgefertigten Quelle von Gelen, aber nur einen Bruchteil der Kosten für im Handel erhältliche Minigelen. Ein wichtiger Schritt in diesem Verfahren wir.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Die Autoren danken dem Howard Hughes Medical Institute für eine UF Science for Life Award an AH
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenz | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare |
| Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Cassette (1,0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Erhältlich in 2, 5, 10, 12, 15 und 2D-Brunnen |
| Kunststoff Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 ml Seitenarm Kolben | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base Trenngelpuffer | 1,5 M Tris-Base pH 8,7 | ||
| Acrylamid | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-Acrylamid | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30,8% Acrylamid-Lösung | 30:0.8 Acrylamid: Bisacrylamid in IRG-H 2 O | ||
| 10% igen APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0,1 g Ammoniumpersulfat in 1 ml IRG-H 2 O, unmittelbar vor der Verwendung hergestellt |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-Butanol mit 1X Trenngelpuffer gesättigt | 5.02 1-Butanol auf 1X Trenngelpuffer | ||
| 4X Tris-Base Stacking-Gel-Puffer | 1,5 M Tris-Base pH 6,8 | ||
| Gel Kamm | Invitrogen | NC3015 | 15 gut, 1,0 mm Stärke |
| Impulssiegelgerät | TEW Elektroheizausruestung | ||
| Heisssiegelfähige Pouch | Kapak / Scotchpak | 1 Pint Größe (6,5 "x 8") | |
| Gel-Speicherpuffer | 1X Sammelgel-Puffer mit 0,1% Natriumazid | ||
| Novex Tris-Glycin-SDS-Probenpuffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Laufpuffer | Invitrogen | LC2675 | 1L von 10X Lager: 29,0 g Tris-Base, 144,0 g Glycin, 10,0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Sichere Stain | Invitrogen | LC6065 |
Referenzen
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
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Nachdrucke und Genehmigungen
