Methodenartikel

Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification

DOI:

10.3791/409

⸱

1. November 2007

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Isolation von Lymphozyten mit der Miltenyi MACs Kit ist eine zuverlässige Methode, um Zellen aus ganzen lymphatischen Gewebe-Homogenaten zu reinigen. Cells unter Verwendung der Miltenyi-System sind in der Regel ≥ 96% rein. Hier zeigen wir, welche Schritte unternommen wurden, um CD4 + T-Zellen, einer der vielen Kits von Miltenyi angeboten isolieren.

Zusammenfassung

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Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in der Regel zu reinigen Zellen, die ≥ 96% reine CD4 + / CD3 + sind. Dieses Protokoll ist in Verbindung mit dem Protokoll Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen in Heft 7 des Jupiter veröffentlicht, für die Reinigung von T-Zellen und anderen Zelltypen zu adoptiv für bildgebende Zwecke übertragen werden. Obwohl wir nicht zeigen, FACS-Analyse in diesem Protokoll video, ist es dringend empfohlen, die gesamte Reinheit der isolierten Zellen mit den entsprechenden Antikörpern via FACS überprüfen. Darüber hinaus zeigen wir die nicht-sterile Methode der T-Zell-Isolierung. Wenn sterile Zellen für Ihre Endbenutzer-Anwendung benötigt werden, sollten Sie alle bewiesen Verfahren in der Gewebekultur Haube unter Standard-sterilen Bedingungen zu tun. Wir danken Ihnen für das Ansehen und viel Glück mit Ihrem eigenen Experimenten!

Protokoll

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Bitte lesen und befolgen das Protokoll in der Miltenyi-Kit oder online unter einbezogen http://www.miltenyibiotec.com/ .

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Diskussion

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Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in d...

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Offenlegungen

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

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Wir wollen Rebecca Paquett für die Herstellung von MACS-Puffer zu danken.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
MACS-PufferReagenzKeine AngabeKeine AngabeWie von Miltenyi beschrieben herstellen.
CD4+ T-Zell-Isolationskit: Untouched-IsolierungReagenzMiltenyi Biotec130-090-860Zur Verwendung mit dem Miltenyi-System.
Sterile phosphatgepufferte Salzlösung (PBS)ReagenzZur Herstellung des MACS-Puffers.
Corning 35-mm-Kulturschale, nicht TC-behandeltSonstigesCorning430588Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.
70-Mikron-ZellsiebWerkzeugBD Biosciences352350Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.
6-mL-SpritzeWerkzeugTyco Healthcare, Covidien8881516051Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.
10x Dulbecco’s Phosphatgepufferte Salzlösung (DPBS)ReagenzInvitrogen14200-075Zur Verwendung bei der Lyse von roten Blutkörperchen (RBC-Lyse).
Steriles WasserReagenzSigma-AldrichW4502Zur Verwendung bei der Lyse von roten Blutkörperchen (RBC-Lyse).

Referenzen

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  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

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Schlagwörter

Negative SelektionZellisolationmagnetische Bead SeparationErythrozytenlyseEinzelzellsuspensionLS S uleDurchflusszytometrie

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