Methodenartikel

Reparatur eines Critical-sized Calvaria Defect Modells mit aus Fettgewebe gewonnenen Stromazellen aus Lipoaspirate Geerntet

DOI:

10.3791/4221

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31. Oktober 2012

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1Department of Surgery, Stanford University , 2Department of Surgery, Duke University , 3Department of Surgery, Saint Joseph Mercy Hospital, 4School of Medicine, University of California, San Francisco , 5School of Dentistry, University of California, Los Angeles

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von Fettgewebe gewonnen Stromazellen aus lipoaspirate und die Schaffung einer 4 mm kritische Größe Calvaria Defekt Skelett Regeneration zu bewerten.

Zusammenfassung

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Kraniofazialen skelettalen Reparatur und Regeneration bietet das Versprechen von de novo Gewebebildung durch einen Zell-basierten Ansatz Verwendung Stammzellen. Fettgewebe gewonnene Stromazellen (ASC) haben sich eine reiche Quelle von multipotenten Stammzellen fähig ist, osteogene, chondrogener, adipogene und myogenen Differenzierung. Viele Studien haben die osteogene Potential dieser Zellen in vivo untersucht unter Verwendung von verschiedenen Biomaterialien Gerüst für zellulare Lieferung. Es hat sich gezeigt, dass durch Verwendung eines osteokonduktiven, Hydroxylapatit-beschichteten Poly (Milch-co-Glykolsäure) (PLGA HA-) Gerüst seeded mit ASCs eine kritische Größe Calvaria Defekt, ein Defekt, der durch seine Unfähigkeit, eine spontane definiert ist Heilung über die gesamte Lebensdauer des Tieres, kann wirksam werden zeigen, robust Knochenregeneration. Diese in vivo Modell zeigt die Grundlage für translationale Ansätze gerichtet, um den Knochen zu regenerieren - die zelluläreKomponente und biologischen Matrix. Diese Methode dient als Modell für die letztendliche klinische Anwendung einer Vorläuferzelle in Richtung der Reparatur eines Gewebedefekts bestimmten.

Protokoll

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Ein. Zellisolation & Expansion

  1. Alle Einwilligung des Patienten und experimentelle Protokolle wurden überprüft und von der Stanford University Institutional Review Board (Protokoll # 2188 und # 9999) genehmigt.
  2. Erhalten menschlichen subkutanen Fettgewebe von elektiven lipoaspiration Verfahren unter örtlicher / Vollnarkose.
  3. Es wird zwei Schichten in der lipoaspirate (1A) sein. Der Überstand enthält den größten Teil des verarbeiteten Zellmaterial. Die untere Schicht wird meistens injiziert Kochsalzlösung. Adipose-abgeleiteten Stromazellen aus beiden Schichten können geerntet werden, aber die Ausbeute ist wesentlich....

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Diskussion

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Da die Isolation von Fettgewebe-abgeleiteten Stromazellen 2 ab lipoaspirate wurden diese Zellen in einer Vielzahl von zellulären Abstammungslinien differenziert. Fettgewebe ist aus mesodermalen Ursprungs und daher multipotent Fettgewebe gewonnene Stromazellen wird wahrscheinlich am effektivsten mit der Anwendung zu einem mesodermalen Linie. Die Fähigkeit, Skelettgewebe erzeugen ist besonders kritisch, da der Mangel an Entnahmestellen für eine autologe und die damit verbundenen Einschränkungen aus Kunststoff e.......

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Offenlegungen

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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Danksagungen

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Wir möchten Dr. George Commons und Dr. Dean Vistnes für ihre Unterstützung und Zusammenarbeit unserer Forschung danken. Diese Arbeit wird von National Institute of Dental und kraniofaziale Forschung Zuschüsse 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 und RC2 DE020771-02, der Oak Foundation und Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medizin zum MTL Dr. Hyun unterstützt wird von der Saint Joseph Mercy Hospital GME unterstützt .

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Name des Reagenz: Firma Katalog-Nummer Kommentare (optional)
Lipoaspirate Ernte
PBS Gibco 10010-023
Hanks Balanced Salt Solution Cellgro 21-023-CV
Collagenase Sigma C6885-500MG
Zellsieb 100 um BD Falcon 352360
Steri-top 500 ml 0,22 um-Filter Millipore SCGPT05RE
Calvaria Defect
Z500 Brushless MicromotorsUM50C NSK NSKZ500
Circular Knife 4,0 mm Xemax Surgical CK40

Referenzen

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  1. Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
  2. Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....

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Schlagwörter

Stromale Gef fraktionHydroxyapatit Ger stosteogene DifferenzierungGewebedigestionZellisolationDurchflusszytometrieMikro CT Analysehistologische F rbung

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