Isolieren Primäre Melanozyten-ähnlichen Zellen aus der Maus Herz

Zusammenfassung

In diesem Protokoll w e identifiziert eine neue Population von Melanozyten-ähnlichen Zellen (auch als Herz Melanozyten) in den Herzen von Mäusen und Menschen, die an Vorhofrhythmusstörungen löst bei Mäusen bei.

Zusammenfassung

Wir identifizierten eine neue Population von Melanozyten-ähnlichen Zellen (auch als Herz Melanozyten) in den Herzen von Mäusen und Menschen, die an Vorhofrhythmusstörungen Trigger in Mäusen bei. Um die elektrischen und biologischen Eigenschaften von Herz Melanozyten untersuchen wir ein Verfahren, um sie von Mäuseherzen, die wir von denen zur neonatalen Kardiomyozyten Maus zu isolieren abgeleitet isolieren entwickelt. Um gesünder Herz Melanozyten geeignet für umfangreichere Patch-Clamp-oder biochemische Untersuchungen zu erhalten, ein raffiniertes Verfahren entwickelt, die wir für die Isolierung und Beschichtung Herz Melanozyten basierend auf den ursprünglich entwickelt, um Haut-Melanozyten zu isolieren. Die raffinierte Vorgehensweise wird in diesem Beitrag gezeigt und produziert eine größere Anzahl von gesunden Melanozyten-ähnlichen Zellen, die als reine Population oder mit Kardiomyozyten beschichtet werden können.

Einleitung

Wir haben vor kurzem identifiziert eine neuartige Zellpopulation im Herzen von Mäusen und Menschen, die Melanin-Synthese Enzyme zu exprimieren und morphologisch ähneln kutanen Melanozyten. Wir als "Herz Melanozyten" Diese Zellen und fanden sie in anatomischen Stellen, an denen Vorhofarrhythmie löst häufig bei Menschen stammen vorhanden sind. Wir fanden auch, Herz Melanozyten dazu beitragen, Vorhofrhythmusstörungen bei Mäusen mit Keimbahn Löschung von DCT. Herz Melanozyten dünn gesamten Maus Vorhof, wo sie weniger als 0,1% aller atrialen Zellen umfassen verteilt. Um die elektrischen und biologischen Eigenschaften von Herz Melanozyten untersuchen wir ein Verfahren, um ....

Protokoll

1. Vorbereitung die notwendigen Lösungen und Anlagen

1. Erstens, die chirurgischen Instrumente zu sterilisieren (gerade Form einer Pinzette, gebogene Form einer Pinzette, Schere gerade Form und gekrümmter Form einer Schere) durch Autoklavieren sie für 15 min. bei 121 ° C aufweist. Bereiten Sie 2 Sets von Instrumenten, wo ein Satz zum Präparieren Sie sich die Herzen und den anderen Satz verwendet wird, zum Zerkleinern das Gewebe verwendet werden.
2. Lösen Sie 1 Päckchen MCDB153 Kulturmedien in 900 ml sterilisiertem, gefiltertem Wasser und langsam rühren, bis das Pulver aufgelöst hat. Fügen Sie 1,2 g Natriumbicarbonat, oder 15,7 ml Natriumhydrogencarbona....

Ergebnisse

Die in diesem Artikel beschriebene Protokoll ist eine verbesserte Technik im Vergleich zu der, die wir zuvor für die Isolierung Herz Melanozyten von murinen Herz veröffentlicht. Dieses Verfahren setzt die Verwendung von Fluoreszenzmarkern durch Melaninsynthese enzymspezifische Cre-Rekombinase angetriebenen Herz Melanozyten-ähnlichen Zellen zu markieren. Es ist wichtig, um einen Marker zu verwenden, um Herz Melanozyten Etikett beim Arbeiten mit frisch isolierten embryonalen oder neonataler Zellen, da die morphologischen .......

Diskussion

Herz Melanozyten sind in anatomischen Stellen innerhalb des Herzens, die häufig Anlass zu Vorhofarrhythmie Trigger vorhanden. Diese Regionen umfassen die Lungenvenen, den atrioventrikulären Annulus, das hintere linke Atrium und das Foramen ovale (Abbildung 4). Um die Rolle dieser Zellen in Arrhythmogenese spielen verstehen, entwickeln wir Techniken, um sie zu isolieren und studieren ihre Physiologie. Jedoch haben wir erkannt, daß eine Verbesserung dieser Technik ergeben gesünder und größeren Mengen von .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
MCDB 153	Sigma-Aldrich	M7403	In Wasser lösen
DPBS, ohne Calcium und Magnesium	Invitrogen	14190136	Lagerkonzentration: 1x Arbeitskonzentration: 1x
Penicillin-Streptomycin	Invitrogen	15140163	Lagerkonzentration: 100x Arbeitskonzentration: 1x
Fetales Rinderserum	Life Technology	Zertifiziert	Arbeitskonzentration: 4 %
TPA	Sigma-Aldrich	P1585	In DMSO lösen Lagerkonzentration: 3,2 μM Arbeitskonzentration: 32 nM
Transferrin	Sigma-Aldrich	T8158	In DPBS lösen Lagerkonzentration: 0,1 mg/ml Arbeitskonzentration: 1 μg/ml
Dibutyryl-cAMP	Sigma-Aldrich	D0627	In DPBS lösen Lagerkonzentration: 0,5 mM Arbeitskonzentration: 5 μM
Insulin	Sigma-Aldrich	I6634	In 10 mM Essigsäure lösen Lagerkonzentration: 1 mg/ml Arbeitskonzentration: 5 μg/ml
Grundlegender FGF	BD Biosciences	354060	In Wasser lösen Lagerkonzentration: 4 ng/μl Arbeitskonzentration: 4 ng/ml